[发明专利]阳离子型蒙脱石用于恶性肿瘤细胞DNA分离提纯的方法

说明书

本发明涉及一种阳离子型蒙脱石在恶性肿瘤细胞DNA分离提纯中的应用，通过采用十二烷基硫酸钠溶液对海拉细胞进行裂解，经加热、超声后得到细胞裂解液，然后将阳离子型蒙脱石悬浊液，以醋酸钠调节pH至5.0～6.0，加入到细胞裂解液中进行DNA吸附，吸附后离心分离，以洗脱液洗涤下层沉淀进行DNA脱附。本发明通过对成本低廉的蒙脱石进行改性，改性后得到的阳离子型蒙脱石可快速高效的提纯恶性肿瘤细胞DNA，同时对恶性肿瘤细胞DNA提取量可按需调控，其分离提纯过程不会对恶性肿瘤细胞DNA的结构造成破坏。

技术领域

本发明涉及恶性肿瘤细胞DNA的分离提纯，具体涉及一种阳离子型蒙脱石在恶性肿瘤细胞DNA分离提纯中的应用。

背景技术

肿瘤是严重危害人类健康的疾病之一。肿瘤细胞在坏死、凋亡后释放出可以在人体血液系统中不断循环的肿瘤基因组游离DNA片段，称为ctDNA。ctDNA可无创地用于肿瘤的早期诊断、发展走向以及预后判断等，是一种应用前景广泛的肿瘤标志物。一个100g(3×10¹⁰个癌细胞)的肿瘤，每天约有3.3％的肿瘤细胞DNA进入血液循环。DNA作为遗传信息的载体，存储着与人体疾病相关的重要信息。实现恶性肿瘤细胞DNA的检测可以为人体的疾病走向与潜在隐患进行预测。

唐旖旎等(有机与无机改性蒙脱石对鲑鱼精DNA吸附特征研究功能材料2012年第13 期(43)卷)通过Fe³⁺及Al³⁺在蒙脱石层间形成聚羟基Fe/Al化合物达到柱撑效果，讨论该聚羟基Fe/Al蒙脱石对鲑鱼精DNA的吸附特征，但未对脱附后的DNA能否于细胞中成功表达进行讨论，同时根据文中对DNA吸附量的排序，聚羟基Fe/Al制备出的无机柱撑蒙脱石对DNA的吸附量小于原材料。当前能够成功提取DNA并表达的商品化试剂盒包括离心柱试剂盒和磁珠试剂盒，但两种试剂盒均存在诸如成本高、不便于高通量操作等缺陷。本发明涉及的蒙脱石作为一种天然产出的层状硅酸盐矿物，具有材料易得、成本低廉、无明显毒性和对恶性肿瘤细胞DNA提取量可按需调控的优点，改性后阳离子型蒙脱石对恶性肿瘤细胞DNA 的吸附效率最高可达原料的4.5倍左右，有望实现恶性肿瘤的早期预测并降低恶性肿瘤试剂盒产品生产成本。

发明内容

针对现有诊断试剂盒中提纯模型单一、不便于高通量操作和材料合成成本高等方面的问题，本发明提出了一种阳离子型蒙脱石在恶性肿瘤细胞DNA分离提纯中的应用，通过对成本低廉的蒙脱石进行改性，改性后得到的阳离子型蒙脱石可快速高效的提纯恶性肿瘤细胞 DNA，同时对恶性肿瘤细胞DNA提取量可按需调控，其分离提纯过程不会对恶性肿瘤细胞 DNA的结构造成破坏。

为了达到上述目的，本发明提出了一种阳离子型蒙脱石在恶性肿瘤细胞DNA分离提纯中的应用，包括以下步骤：

(1)采用十二烷基硫酸钠溶液对海拉细胞进行裂解，细胞裂解液经加热、超声后冻存备用；

(2)将阳离子型蒙脱石配为悬浊液，以醋酸钠调节pH至5.0～6.0，加入步骤(1)所得细胞裂解液进行DNA吸附，离心分离，取上清液并测定其中的DNA含量，下层沉淀备用。

(3)以洗脱液洗涤步骤(2)所得下层沉淀，离心分离，取上清液并测定其中的DNA含量。

所述步骤(1)中加热温度为80～100℃，时间为3～10min，超声振幅为20％，功率为500W。

所述步骤(1)中十二烷基硫酸钠溶液的质量分数为1％～5％。

所述步骤(2)中悬浊液的质量浓度为20g/L～50g/L。

所述步骤(2)中阳离子型蒙脱石为锂离子型蒙脱石或铝离子型蒙脱石中的一种。

所述锂离子型蒙脱石或铝离子型蒙脱石的制备方法为：将钙基蒙脱石加入到碳酸锂或硝酸铝溶液中，钙基蒙脱石与碳酸锂或硝酸铝的质量比为1：0.1～0.8，于50～80℃下恒温水浴搅拌，离心分离，干燥即得。