[发明专利]一种牛肉蛋白中碳、氮稳定同位素标准样品的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及畜禽产品稳定同位素标准样品技术领域，具体涉及一种牛肉蛋白中碳、氮稳定同位素标准样品的制备方法。

背景技术

针对我国畜产品市场以次充好、产地来源不明等问题，迫切需要提供有效的质量基准手段，稳定同位素技术可以提供动物组织的产地及喂养信息，农产品溯源中的应用依赖于同位素质谱分析测试技术的准确性，而同位素测量技术中需要稳定同位素标准物质作为定值依据，因此，生物样品的稳定同位素标准物质的研制是今后国际标准物质研制的主要需求和热点。

我国对碳氮稳定同位素标准物质的研制停留在上个世纪90年代，开展生物基质的稳定同位素标准物质的研发不仅可以填补国内空白，也可以追赶国际标准物质研制的水平，使得我国同位素标准物质研制处于国际领先水平，同时为我国畜禽产品质量分级、真伪鉴别、产地溯源等产业发展迫切需求提供有效支持，实现我国畜禽产品优质优价市场秩序及畜牧业健康可持续发展。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种牛肉蛋白中碳、氮稳定同位素标准样品的制备方法，为我国畜禽产品质量分级、真伪鉴别、产地溯源等产业发展提供有效支持，实现我国畜禽产品优质优价市场秩序及畜牧业的健康可持续发展。

本发明的目的是通过以下技术方案来实现的：

一种牛肉蛋白中碳、氮稳定同位素标准样品的制备方法，包括以下检测步骤：

S1.采集牛肉样品，依次进行解冻、切丁、绞碎、干燥处理；

S2.然后将牛肉样品脱脂处理，再进行研磨至过孔径为0.15mm的筛板；

S3.随后将牛肉样品进行混匀、干燥处理，得到标准样品。

进一步地，所述步骤S1中，采集哈尔滨宾西和四川牦牛的牛腱子肉作为制备基体标准样品的原料。

进一步地，所述步骤S1中，将采集的牛肉在常温下解冻，然后将牛肉切成1cm³的肉丁，绞碎后在50℃下干燥24h。

进一步地，所述步骤S2中，采用索氏提取法将牛肉样品进行脱脂。优选地，将牛肉样品包在滤纸包内，放入提取管内；提取瓶内加入石油醚，加热提取瓶，石油醚气化，由连接管上升进入冷凝器，凝成液体滴入提取管内，浸提样品中的牛肉样品；待提取管内石油醚液面达到一定高度，溶有粗脂肪的石油醚经虹吸管流入提取瓶；流入提取瓶内的石油醚继续被加热气化、上升、冷凝，滴入提取管内，如此循环往复，抽提8小时。

进一步地，所述步骤S3中，在槽形混合机内中，将转速调在中档，在避光的环境中搅拌2h；然后放入干燥箱中50℃干燥4小时。

进一步地，所述制备方法还包括样品均匀性初判，具体为：将里面的标准样品铺平，选择不同位置、不同深度的5个点测定标准样品的碳、氮稳定同位素比，比值的标准偏差小于0.2为合格。

进一步地，所述制备方法还包括样品灭菌处理，具体为：采用辐照灭菌法对标准样品进行灭菌处理。优选地，利用放射性同位素Co⁶⁰的γ射线杀灭样品中的病原微生物和其他腐败微生物，从而达到保藏或保鲜的目的。

进一步地，所述制备方法还包括样品水分测定，具体为：采用减压干燥的方法测定了牛肉蛋白标准样品中的水分。

进一步地，所述制备方法还包括样品水分测定，具体为：采用减压干燥的方法测定了牛肉蛋白标准样品中的水分。

进一步地，所述制备方法还包括样品均匀性检验，具体为：从500份标准样品中随机选取20份标准样品进行均匀性检验，并进行三次平行检验，对测量的数据进行方差分析，通过组间方差和组内方差的比较来判断不同瓶中牛肉蛋白粉样品中碳、氮稳定同位素比测量值之间的系统性差异，无系统差异性则样品均匀。

进一步地，所述制备方法还包括样品水分变化的测定，具体为：对不同湿度、不同暴露时间下牛肉蛋白粉吸潮情况进行了研究。

进一步地，所述制备方法还包括样品稳定性考察，所述样品稳定性考察包括长期稳定性考察和短期稳定性考察，

所述长期稳定性考察为：标准物质的稳定性考察按先密后疏的原则，分别在第0、1、3、6、9、15个月进行稳定性检测；检验方法与均匀性检验相同；每次取3瓶，做标准物质的长期稳定性统计检验，取平行三次，记录结果的平均值；结果的变动在定值结果5％的不确定度范围内，作为判定标准物质稳定的原则；

所述短期稳定性考察为：将样品置于4℃、20℃和40℃恒温箱中保存，分别在第0、3、5、7、14天进行稳定性监测，测定方法与长期稳定性检测相同。