[发明专利]可诱导性遗传重组酶系统CrexER

权利要求书

1.一种融合蛋白，其特征在于，所述融合蛋白是重组酶Cre、雌激素受体ER以及重组酶Dre特异性识别的重组位点rox融合形成的蛋白，其中，所述融合蛋白的氨基酸序列从N端到C端依次是重组酶Cre、rox重组位点、雌激素受体ER和rox重组位点。

2.如权利要求1所述的融合蛋白，其特征在于，

所述重组酶Cre的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-344位所示；

所述雌激素受体ER的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第355-673位氨基酸残基所示；和/或

所述rox重组位点的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第345-354位所示。

3.如权利要求1所述的融合蛋白，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

4.一种核酸分子，其特征在于，所述核酸分子的多核苷酸序列选自：

(1)权利要求1－3中任一项所述的融合蛋白的编码序列；和

(2)(1)所述序列的互补序列。

5.如权利要求4所述的核酸分子，其特征在于，所述编码序列如SEQ ID NO:1所示。

6.一种核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物含有权利要求4或5所述的核酸分子。

7.如权利要求6所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是重组表达载体。

8.如权利要求6所述的核酸构建物，其特征在于，所述核酸构建物是在权利要求4或5所述的核酸分子的两端分别含有5’同源臂和3’同源臂的基因敲入载体。

9.一种宿主细胞，其特征在于，所述宿主细胞：

(1)表达权利要求1－3中任一项所述的融合蛋白；

(2)含有权利要求4或5所述的核酸分子；和/或

(3)含有权利要求7所述的重组表达载体或权利要求8所述的基因敲入载体。

10.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒含有权利要求8所述的基因敲入载体。

11.如权利要求10所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还含有利用CRISPR/Cas9技术将所述基因敲入载体中所含的权利要求4或5所述的核酸分子敲入细胞基因组中目标位置所需的试剂。

12.如权利要求11所述的试剂盒，其特征在于，所述试剂包括Cas9酶或其表达载体和sgRNA或其表达载体。

13.如权利要求12所述的试剂盒，其特征在于，所述Cas9酶为来自化脓链球菌的Cas9、来自金黄色葡萄球菌的Cas9或来自嗜热链球菌的Cas9。

14.权利要求1－3中任一项所述的融合蛋白、权利要求4或5所述的核酸分子、权利要求7所述的表达载体或权利要求8所述的基因敲入载体在遗传靶向操纵中的应用。