[发明专利]可诱导性遗传重组酶系统CrexER

说明书

本发明涉及可诱导性遗传重组酶系统CrexER，该CrexER是一种融合蛋白，该融合蛋白是重组酶Cre、雌激素受体ER以及重组酶Dre特异性识别的重组位点rox融合形成的蛋白。本发明还提供该融合蛋白的编码序列、含该编码序列的核酸构建物、宿主细胞等。本发明利用Dre‑rox同源重组的先行发生诱导Cre‑loxP同源重组的随后发生，实现了A‑Dre和B‑Cre标记细胞交集(A⁺B⁺)的靶向操纵。本发明极大的拓展了遗传靶向操纵的应用范围，为更为精准的遗传靶向操纵和生物医学研究提供了宝贵的策略。

技术领域

本发明涉及可诱导性遗传重组酶系统CrexER。

背景技术

过去的10年中，在小鼠模型中使用的基因遗传操纵技术大大推进了对许多人类疾病的了解，其中最为广泛应用的基因遗传操纵工具主要基于Cre-loxP同源重组系统。到目前为止，成千上万的含有Cre或loxP位点的遗传工具小鼠被用来解决有关细胞谱系、器官发育、组织再生和疾病等各种问题。这个基因靶向系统的精准度很大程度上取决于Cre表达的特异性，通常Cre是在某个基因启动子的驱动下表达。尽管传统的基于Cre-loxP同源重组的遗传操纵技术具有非常强大的功能，但是当Cre的表达特异性或精准度不够高时，就会造成很多实验结果解释的不准确甚至出现较大争议。因此，发展出更为精准的基因靶向操纵系统将极大的推进基因体内的功能性研究。更广泛来讲，更为精准的基因靶向操纵系统将会为众多领域的基础研究和疾病临床治疗带来巨大的推进作用。

发明内容

本发明第一方面提供一种融合蛋白，所述融合蛋白是重组酶Cre、雌激素受体ER以及重组酶Dre特异性识别的重组位点rox融合形成的蛋白。

在一个或多个实施方案中，所述重组酶Cre的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第1-344位所示。

在一个或多个实施方案中，所述雌激素受体ER的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第355-673位氨基酸残基所示。

在一个或多个实施方式中，所述rox位点的氨基酸序列如SEQ ID NO:2第345-354位所示。

在一个或多个实施方案中，所述融合蛋白的氨基酸序列从N端到C端分别是重组酶Cre、rox重组位点、雌激素受体ER和rox重组位点。

在一个或多个实施方案中，所述融合蛋白的氨基酸序列如SEQ ID NO:2所示。

本发明第二方面提供一种多核苷酸序列，选自：

(1)本文融合蛋白的编码序列；

(2)(1)所述序列的互补序列。

在某些实施方案中，所述多核苷酸序列选自SEQ ID NO:1或其互补序列。

本发明第三方面提供一种核酸构建物，所述核酸构建物含有本文所述多核苷酸序列。

在某些实施方案中，所述核酸构建物还在所述多核苷酸序列的两侧分别含有5’同源臂和3’同源臂。

在某些实施方案中，所述核酸构建物是重组表达载体或基因敲入载体。

在某些实施方案中，所述基因敲入载体是以pBR322为骨架构建的载体。

本发明第四方面提供一种试剂盒，所述试剂盒含有本文所述的基因敲入载体，和任选的利用CRISPR/Cas9技术将所述基因敲入载体中本发明融合蛋白的编码序列敲入细胞基因组中目标位置所需的试剂。

在一个或多个实施方案中，所述试剂包括Cas9酶或其表达载体和sgRNA或其表达载体。

在一个或多个实施方案中，所述Cas9酶为来自化脓链球菌的Cas9(SpCas9)、来自金黄色葡萄球菌的Cas9(SaCas9)或来自嗜热链球菌的Cas9(St1Cas9)。