[发明专利]一种菜籽抗炎肽的分离纯化方法在审
申请号: | 201710946903.2 | 申请日: | 2017-10-12 |
公开(公告)号: | CN107502644A | 公开(公告)日: | 2017-12-22 |
发明(设计)人: | 王立峰;袁强;姚轶俊;殷实;徐斐然;鞠兴荣 | 申请(专利权)人: | 南京财经大学 |
主分类号: | C12P21/06 | 分类号: | C12P21/06;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/16 |
代理公司: | 江苏圣典律师事务所32237 | 代理人: | 邓丽,王伟 |
地址: | 210023 江*** | 国省代码: | 江苏;32 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 菜籽 抗炎肽 分离 纯化 方法 | ||
1.一种菜籽抗炎肽的分离纯化方法,其特征在于包括以下步骤:
a.将菜籽脱脂处理,得到的菜籽饼粕,并粉碎过筛,得到菜籽粉;将得到的菜籽粉用碱提酸沉的方法制得菜籽蛋白,并冷冻干燥;将得到菜籽蛋白用碱性蛋白酶水解和风味蛋白酶进行分步酶解,得到菜籽蛋白水解物;
b.将步骤a得到的菜籽蛋白水解物通过的超滤膜,收集分子量小于3K的组分;
c.将步骤b收集的分子量小于3K的组分通过葡聚糖凝胶柱分离,得到若干组分,并收集具有紫外吸收峰的组分;
d.将步骤c得到的活性较强的组分通过半制备液相分离,得到若干组分,收集主要的洗脱峰,冷冻干燥后检测各分离组分的抗炎活性,活性最强的即所述菜籽抗炎肽。
2.根据权利要求1所述的菜籽抗炎肽的分离纯化方法,其特征在于步骤b中,将菜籽蛋白水解物配制成质量浓度为0.5-1%的溶液后,反复几次通过的超滤膜,使其超滤的压力控制在0~1MPa范围内,收集小于3K的组分,并冷冻干燥。
3. 根据权利要求1所述的菜籽抗炎肽的分离纯化方法,其特征在于步骤c中,葡聚糖凝胶过滤层析的洗脱条件:以双蒸水为流动相进行洗脱样品,上样浓度1-10mg/mL,上样体积5-10ml,上样流速9-18 mL/h,洗脱流速9-48mL/h,洗脱温度20-32℃,紫外检测波长为280 nm,洗脱液自动部分收集, 将同一分离峰合并,冷冻干燥后检测各分离组分的抗炎活性。
4.根据权利要求1所述的菜籽抗炎肽的分离纯化方法,其特征在于步骤d中,用半制备液相进一步分离,液相条件为:洗脱梯度为0-60min,乙腈5-100%,流速为1-2.46mL/min,紫外检测波长215nm,柱温25-35℃,收集主要的洗脱峰,冷冻干燥后检测各分离组分的抗炎活性,活性最强的即所得菜籽抗炎肽。
5.一种根据权利要求1-4任一项所述方法分离纯化得到的菜籽抗炎肽。
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