[发明专利]一种脂肪SVF细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途

说明书

本发明公开了一种脂肪SVF细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途，该制备方法包含：步骤S1：在无菌条件下采集脂肪样本，保存在保存液中，加入洗涤液对脂肪样本进行预处理；步骤S2：将预处理的脂肪样本离心，脂肪组织呈黄色，取出脂肪组织并加入等体积已预热的消化液，密封，在恒温条件下使脂肪组织和消化液混合均匀，消化至无大块组织块或虽有大块组织块但聚集大量脂质，离心；步骤S3：待步骤2离心结束，去除上层脂质，加入洗涤液将沉淀重悬混匀，过滤，再次添加洗涤液，离心，去除上清液，得到脂肪SVF细胞。本发明制备方法采用的洗涤液和消化液使得制备的脂肪SVF细胞的细胞数、细胞活率及纯度大幅度上升，保证提取的SVF细胞在临床治疗中的效果。

技术领域

本发明涉及一种脂肪SVF细胞的制备方法，具体涉及脂肪SVF细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途。

背景技术

成体干细胞是近来发现的一群存在于人体各组织器官内的具有多项分化潜能的干细胞。研究发现，人源脂肪来源的间充质干细胞(human Adipose-derived Stem cells，hASCs)作为种子细胞有诸多优点：(1)易于取材(只需通过负压真空抽脂)；(2)具有多方向的分化潜能；(3)脂肪间充质干细胞免疫原性低；(4)具有免疫抑制的调节作用。

脂肪SVF(Stromal Vascular Fraction，血管基质部分)细胞是从脂肪组织中分离富集出来的基质细胞群，去除了成熟的脂肪细胞，其中包含多种细胞成分，包括脂肪干细胞、内皮细胞、周细胞、成纤维细胞和少量未去除的成熟脂肪细胞。脂肪SVF细胞中的间充质干细胞在临床多个领域都有巨大的应用潜力。

在国内外多年研究中，脂肪SVF细胞已被证实具有结缔组织修复，免疫调节，表皮修复等生理功能。现有技术通常将脂肪组织经胶原酶消化、过滤、离心除去成熟脂肪细胞后得到脂肪SVF细胞。

但是，就目前技术而言，对于脂肪SVF细胞临床级应用的提取和制备还存在以下的不足：

1、传统胶原酶Ⅰ消化单一，胶原酶使用量多，SVF细胞纯度不高；

2、制备最后得到的SVF细胞数得率、细胞纯度及细胞活率不高，不适用于临床，保证不了临床治疗的效果。

发明内容

本发明的目的是提供一种脂肪SVF细胞临床级高效制备和冻存的方法及其用途，该制备方法能够解决现有技术胶原酶使用量大，以及细胞活率低，提取的SVF纯度不高等问题，能够减少胶原酶的使用量并提高细胞活率及SVF纯度，以保证在临床治疗时的应用效果。

为了达到上述目的，本发明提供了一种脂肪SVF细胞临床级高效制备方法，该制备方法包含：

步骤S1：在无菌条件下采集脂肪样本，保存在保存液中，加入洗涤液对脂肪样本进行预处理；

步骤S2：将预处理的脂肪样本离心，脂肪组织呈黄色，取出脂肪组织并加入等体积已预热的消化液，密封，在恒温条件下使脂肪组织和消化液混合均匀，消化至无大块组织块或虽有大块组织块但聚集大量脂质，离心；

步骤S3：待步骤S2离心结束，去除上层脂质，加入洗涤液将沉淀重悬混匀，过滤，再次添加洗涤液，离心，去除上清液，得到脂肪SVF细胞。

在步骤S1中，所述的洗涤液包含：生理盐水和人血白蛋白。

在步骤S2中，所述的消化液包含：人血白蛋白、0.9％生理盐水、氯化镁和混合胶原酶，所述的混合胶原酶的质量：人血白蛋白的体积：0.9％生理盐水的体积为1mg：5mL：15mL。

在步骤S1中，所述的保存液包含：氯化钠、青霉素和链霉素。

在所述的保存液中，所述的氯化钠采用0.9％生理盐水；所述的青霉素的浓度为100μg/mL；所述的链霉素的浓度为100μg/mL。