[发明专利]一种制备12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的方法

权利要求书

1.糖基水解酶LXYL-P1-2在制备非天然人参皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。

2.根据权利要求1的用途，其特征在于，底物为3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT。

3.一种生产非天然人参皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT的方法，其特征在于，所述方法包括使用糖基水解酶LXYL-P1-2水解底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT的C3位糖基，生成12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述方法包括：

(1)将所述底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT溶解，制成底物溶液；

(2)在pH为3.0～6.0的缓冲液中，加入步骤(1)的底物溶液和糖基水解酶LXYL-P1-2，在反应温度为25～50℃的条件下，反应24h，水解底物3β,12β-Di-O-Glc-PPD和/或3β,12β-Di-O-Glc-PPT的C3位糖基，从而得到12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将所述底物用二甲基亚砜溶解；步骤(2)中所述缓冲液为醋酸-醋酸钠缓冲液，所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为10～200mM；所述的pH为3.5～5，所述的反应温度为35～50℃。

6.根据权利要求5的方法，其特征在于，所述的醋酸-醋酸钠缓冲液的浓度为50～100mM；所述的pH为4.0～4.5；反应温度为35～45℃。

7.一种生产12β-O-Glc-PPD的重组细胞，所述重组细胞中导入有编码以下蛋白的基因：达玛烯二醇-II合酶、原人参二醇合酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶、糖基转移酶BsUGT1和糖基水解酶LXYL-P1-2。

8.一种生产12β-O-Glc-PPT的重组细胞，所述重组细胞中导入有编码以下蛋白的基因：达玛烯二醇-II合酶、原人参二醇合酶、原人参三醇合酶、烟酰胺腺嘌呤二核苷磷酸-细胞色素P450还原酶、糖基转移酶BsUGT1和糖基水解酶LXYL-P1-2。

9.根据权利要求7或8任一项所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞选自于大肠杆菌、酿酒酵母和/或毕赤酵母细胞。

10.根据权利要求7或8任一项所述的重组细胞，其特征在于，在所述重组细胞中，所述达玛烯二醇-II合酶与绿色荧光蛋白GFP融合表达。

11.根据权利要求7或8任一项所述的重组细胞，其特征在于，所述重组细胞为羊毛甾醇合酶ERG7基因表达被下调的细胞。

12.权利要求7-11任一项所述的重组细胞在制备非天然人参皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。