[发明专利]一种制备12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的方法

说明书

本发明涉及糖基水解酶LXYL‑P1‑2在制备非天然人参皂苷12β‑O‑Glc‑PPD和12β‑O‑Glc‑PPT中的用途，制备12β‑O‑Glc‑PPD和12β‑O‑Glc‑PPT的方法，以及生产12β‑O‑Glc‑PPD和12β‑O‑Glc‑PPT的重组细胞。因此，本发明通过生物方法，实现12β‑O‑Glc‑PPD和12β‑O‑Glc‑PPT的规模化制备。

技术领域

本发明涉及糖基水解酶LXYL-P1-2在制备非天然人参皂苷12β-O-Glc-PPD 和12β-O-Glc-PPT中的用途，12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的制备方法，以 及生产12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的重组细胞。

背景技术

药理学研究证明，人参的主要活性成分是人参皂苷(ginsenoside)。人参皂苷 属于三萜类化合物，根据苷元骨架不同可分为两种类型：一类是达玛烷型四环三 萜类皂苷；另一类是齐墩果烷型五环三萜类皂苷。达玛烷型皂苷在人参皂苷中占 绝大多数，是其中的主要活性成分。达玛烷型皂苷又包括人参二醇型皂苷和人参 三醇型皂苷。在糖基转移酶的作用下，在原人参二醇(protopanoxadiol，PPD)的 C3-OH和C20-OH上引入一个或几个糖基形成人参二醇型皂苷；在原人参三醇 (protopanaxatriol，PPT)的C6-OH和C20-OH上引入一个或几个糖基形成人参三 醇型皂苷。

PPD和PPT除了C3-OH、C6-OH和C20-OH，还有C12-OH，但在人参中还 未发现C12-OH糖基化的皂苷。Atopkina等以PPD为前体，以乙酰溴代葡萄糖为 糖基供体，在氧化银和二氯甲烷的催化下，通过化学方法半合成C12-OH糖基化 的非天然人参皂苷12β-O-D-吡喃葡萄糖基-达玛-24-烯-3β,12β,20S-三醇 (12β-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,12β,20S-triol，简称 12β-O-Glc-PPD)，并进行了药理活性研究。结果发现，12β-O-Glc-PPD对肺癌细 胞的细胞毒活性明显高于Rg3、Rh2等天然人参皂苷(Atopkina LN,MalinovskayaGV,Elyakov GB,et al.，Cytotoxicity of natural ginseng glycosides andsemisynthetic analogues，Planta Medica，1999，65(1)：30-34)。牛一鸣等以C3和C6位羟基乙 酰化保护而C12位羟基裸露的PPT为前体，以特定的邻炔基苯甲酸酯为糖基供体， 在PPh3AuNTf2为催化剂条件下，合成了Chikusetsusaponin L₁₀(即 12β-O-β-D-glucopyranosyl-dammar-24-ene-3β,6α,12β,20S-tetraol，简称 12β-O-Glc-PPT)(牛一鸣，人参皂苷的高效合成，郑州：郑州大学，2012，以引 用的方式将其整体并入本文)。但化学合成方法存在副产物多、收率低和成本高 的问题，且合成过程中会产生大量污染物，对环境造成危害。

有鉴于此，亟待挖掘非天然人参皂苷12β-O-Glc-PPD和12β-O-Glc-PPT的新的 生产途径。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供一种糖基水解酶LXYL-P1-2在制备非天然人参 皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT中的用途。进一步提供一种生产非天然 人参皂苷12β-O-Glc-PPD和/或12β-O-Glc-PPT的方法，以及生产12β-O-Glc-PPD 的重组细胞。