[发明专利]一种靶向昆虫Kir1通道的杀虫剂高通量筛选方法及应用

权利要求书

1.一种褐飞虱Kir1基因，其特征在于，具有SEQ ID NO.5所示的碱基序列，并且编码SEQID NO.7所示氨基酸序列的蛋白质。

2.一种甜菜夜蛾Kir1基因，其特征在于，具有SEQ ID NO.6所示的碱基序列，并且编码SEQ ID NO.8所示氨基酸序列的蛋白质。

3.一种利用权利要求1或2任意一项所述的Kir1基因序列编码蛋白建立的杀虫剂高通量筛选方法，其特征在于，其建立的杀虫剂高通量筛选方法为：将Kir1基因整合到表达质粒，再转染进宿主细胞，通过连续筛选得到组成型表达Kir1基因的单克隆细胞株，使用铊荧光染料分析Kir1通道的活性，并测定候选化合物对Kir1通道的钾离子流的影响。

4.根据权利要求3所述的杀虫剂高通量筛选方法，其特征在于，构建重组Kir1基因表达质粒时采用的载体是pET-15系列质粒、pcDNA系列质粒、plEx系列质粒、pAC系列质粒或pBIEx系列质粒中的一种。

5.根据权利要求4所述的杀虫剂高通量筛选方法，其特征在于，通过DNA转染使所述重组Kir1基因表达质粒在宿主细胞中稳定表达，并得到组成型表达Kir1通道的单克隆细胞株，采用的宿主细胞株是HEK293细胞株、S2细胞株、或SF9细胞株中的一种。

6.根据权利要求3所述的杀虫剂高通量筛选方法，其特征在于，采用铊荧光染料测定单克隆细胞株中组成型表达Kir1通道的钾离子流特性，采用的铊荧光染料选自FluxOR、Fluozin-2或BTC中的任何一种。

7.一种根据权利要求3-6任意一项所述的杀虫剂高通量筛选方法在杀虫剂创制与筛选中的应用。

8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，将所述单克隆细胞株与铊荧光染料孵育60-90分钟后，移除缓冲液，与测定缓冲液孵育10-30分钟，用荧光酶标仪记录荧光值为F₀，再加入含候选化合物的刺激缓冲液后再次记录所述荧光酶标仪的荧光值为F，F/F₀值的大小反映Kir1通道被候选化合物抑制作用的程度。