[发明专利]一种高灵敏的血清总胆汁酸电化学检测方法

权利要求书

1.一种高灵敏的血清总胆汁酸电化学检测方法，其特征在于，检测步骤包括在丝网印刷碳电极(SPCE)工作电极表面加入含有3α-羟基类固醇脱氢酶(3α-HSD)、氧化型辅酶Ⅰ(NAD⁺)和三联吡啶钌(Ru(bpy)₃²⁺)的磷酸盐缓冲液，再施加一定的氧化恒电位，待基线稳定后加入经稀释的待测血清，根据计时电流法(I-t)曲线上增加的电化学信号，实现对总胆汁酸的间接电化学法定量分析，其中，上述缓冲液中所述3α-HSD的活性为1.0kU/L，所述NAD⁺浓度为5.0mmol/L，所述Ru(bpy)₃²⁺浓度为7.0mmol/L，所述磷酸盐缓冲液的浓度为70.0mmol/L，pH值为9.5，所述的血清处理方法为直接稀释法。

2.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述SPCE包括一印制电极的PET基片、PET基片上印制的外部绝缘层和基片上一端的接口，其特征在于所述的基片上印制有三个电极，分别为碳工作电极、Ag/AgCl参比电极和碳浆对电极，三个电极形成一圆形工作区域，各电极通过绝缘膜下的连接导线与接口相连。

3.根据权利要求1所述的电化学检测方法，其特征在于，所述磷酸盐缓冲溶液由100.0mmol/L的磷酸氢二钠溶液和100.0mmol/L的磷酸钠溶液混合而配制。

4.根据权利要求1-3任一项所述的电化学检测方法，其特征在于，包括如下具体步骤：

1)分别取1μL血清样品和1mL超纯水置于Ep管中涡旋混匀，得到一次稀释的血清样品；再分别取1μL一次稀释的血清样品和1mL超纯水置于Ep管中涡旋混匀，得到二次稀释的待测血清样品；

2)分别取20μL 5.0kU/L 3α-HSD溶液、5μL 100.0mmol/L NAD⁺溶液、7μL100.0 mmol/LRu(bpy)₃²⁺溶液和70μL浓度为100.0mmol/L，pH值为9.5的磷酸盐缓冲液置于Ep管中涡旋混匀，得到混合液；

3)所述丝网印刷碳电极与电化学工作站连接，将步骤2)得到的混合液50μL滴加到所述电极的工作区域，在恒电位下进行电流-时间(I-t)曲线分析，至基线恒定时加入步骤1)得到的5.0μL待测血清样品于所述工作电极表面，通过计算I-t曲线中增加的峰电流，从而对待测血清样品中的总胆汁酸进行间接定量测定，恒电位参数设置为1.15V。