[发明专利]一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法

说明书

本发明涉及脂肪间充质干细胞医疗美容领域，公开了一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法。本发明通过物理方法对自体脂肪组织处理，无需引入胶原酶及其长时间的繁琐处理，保留并充分利用细胞外基质，本发明进一步利用自体富血小板因子血浆对自体脂肪间充质干细胞扩增，获得足量的自体脂肪间充质干细胞及干细胞因子，脂肪间充质干细胞与细胞外基质对除皱、软组织修复和面部年轻化具有良好的效果，干细胞因子可广泛应用于皮肤修复。

技术领域

本发明涉及一种脂肪间充质干细胞分离培养及制剂制备方法。本发明属于脂肪间充质干细胞医疗美容领域。

背景技术

干细胞是一类具有自我更新、自我复制能力的多潜能细胞。间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，是再生医学理想的种子细胞。间充质干细胞存在于骨髓、脐带血和脐带组织、胎盘组织、脂肪组织等多种组织中。

脂肪间充质干细胞是近年来从脂肪组织中分离得到的一种具有多向分化潜能的干细胞。近年来，脂肪来源的干细胞已经成为组织工程和再生医学最受欢迎的干细胞之一。自体脂肪源性干细胞来源广泛，能够分泌出大量的生长因子，如表皮、血管、内皮以及成纤维等生长因子，能够促进人体胶原合成，增加血管，更易成活，使得人体皮肤质地产生变化，减少面部斑点，淡化面部皱纹，改善面部凹陷，从而达到面部年轻化的改变。但是只有足够数量、活性强的细胞才能发挥持久的疗效，并且细胞外基质对细胞的植入和功能的发挥具有重要的作用。

尽管骨髓、脐带、胎盘、牙髓等组织中均可分离出间充质干细胞，但是其来源受限，或者自体采集损伤较大。虽然间充质干细胞免疫原性低，但是异体输注依然存在排斥反应。自体脂肪来源丰富、易于采集，且间充质干细胞含量高、增殖活性强、自体来源无排斥，且脂肪组织中可提炼出适用于填充的细胞外基质，是医疗美容领域最合适的种子来源。

间充质干细胞体外培养存在外源污染的风险，如培养体系中牛源血清的使用可能引入牛源支原体、病毒等病原微生物污染的风险，培养体系中猪源胰蛋白酶的使用可能引入猪源支原体、病毒等病原微生物污染的风险。在培养获得足够数量间充质干细胞的同时，应保持细胞干性，避免引入外源病原体的污染。通过物理方法提取脂肪间充质干细胞，快速简洁，避免了胶原酶长时间的操作和外源胶原酶的引入；使用自体富血小板因子血浆及重组胰酶可有效规避动物源性病毒和支原体污染风险；自体富血小板因子血浆能够有效对脂肪间充质干细胞扩增，且保持其多项分化潜能。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是克服现有技术中存在的细胞数量、细胞活性、操作程序、应用风险等缺陷，提供一种简单分离、高效扩增、多向分化潜能、移植后存活效率高的脂肪间充质干细胞制剂方法。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：

本发明提供一种脂肪干细胞分离方法，通过机械破碎脂肪细胞，过滤去除体积较大的基质，离心获得富含干细胞的组份，包括以下步骤：

1)将脂肪组织置于无菌洁净容器内，加入生理盐水，吸去上层油脂和下层生理盐水，如此重复3遍，以去除杂质。

2)将洗涤后的脂肪组织转移至注螺口射器中，接上1.2mm脂肪乳化器和另一螺口注射器，反复推注10-20次后；更换1.0mm脂肪乳化器，反复推注10-20次；更换0.8mm脂肪乳化器，反复推注10-20次；更换0.6mm脂肪乳化器，反复推注10-20次。

3)将破碎的脂肪组织推至一侧注射器，拆下脂肪乳化器后，接上0.2mm的滤头和一只新的注射器，单次推送至新的注射器中。

4)将过滤后的脂肪组织转移至50ml离心管，300g离心5分钟。沉淀即为富含脂肪干细胞的组份。上层油脂冻存待用。

进一步的，本发明还提出了一种脂肪干细胞培养方法，包括以下步骤：