[发明专利]治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法

说明书

本发明提出了一种治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法，该干细胞制剂包括间充质干细胞和胰岛细胞，所述间充质干细胞的浓度为4～6×105个/ml，所述胰岛细胞的浓度为1×106‑8个/ml。本发明将胰岛细胞与间充质干细胞混合，制成混合的干细胞制剂，可通过静脉注射该干细胞制剂的方法来治疗I型糖尿病。间充质干细胞具有调节免疫反应的能力，能够很好地弥补胰岛细胞移植后受体的免疫排斥现象，因而，本发明干细胞制剂治疗糖尿病的疗效非常好。

技术领域

本发明涉及干细胞制剂及其制备方法，尤其及一种用于治疗糖尿病的干细胞制剂及其制备方法。

背景技术

据WHO统计报告，糖尿病已成为严重危害人类健康的三大主要疾病之一。提高糖尿病的治疗水平是一个国家最主要的医疗卫生目标之一。鉴于分泌胰岛素的细胞(β细胞)的缺乏是糖尿病发病的关键所在,理论上只有移植分泌胰岛素的组织或细胞，才能使血糖控制达到生理水平，且不发生低血糖现象。目前糖尿病的内科治疗难以达到此目标，并不能从根本上解决其慢性并发症的问题。

胰岛细胞移植是一种非常有前景的治愈糖尿病的手段。虽然既往已经在实验动物模型中成功地根治了糖尿病，但是在临床应用上仍有很多问题需要解决，如：移植的胰岛细胞需要有足够高的活性才能逆转高血糖状态、移植的胰岛细胞需要足够多的数量、排斥反应、受者再次出现自身免疫反应，等等。

间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)是中胚层来源的成体干细胞，由于来源广泛、扩增潜能巨大、横向分化能力强，以及可以逃避免疫识别和抑制免疫反应等其它干细胞无法比拟的优势，目前备受研究人员的关注。并且，间充质干细胞具有调节免疫反应的能力，能够很好的弥补胰岛细胞移植后受体的免疫排斥现象。

发明内容

本发明需解决的技术问题是提供一种疗效好的治疗糖尿病的干细胞制剂。

为解决上述的技术问题，本发明设计了一种治疗糖尿病的干细胞制剂，其包括间充质干细胞和胰岛细胞，所述间充质干细胞的浓度为4～6×105个/ml，所述胰岛细胞的浓度为1×106-8个/ml。

作为本发明进一步改进，所述治疗糖尿病的干细胞制剂还包括

15-20ng/ml的低分子肝素钠、青霉素、链霉素、和体积分数为1～3％的多糖。

作为本发明进一步改进，所述间充质干细胞的浓度为5×105个/ml，所述胰岛细胞的浓度为1×107个/ml。

本发明还提供了一种治疗糖尿病的干细胞制剂的制备方法，其包括以下步骤：

S1：制备间充质干细胞的步骤，其包括：

S11：获得人脐带组织，经胶原酶Ⅱ消化，再加入DMEM/F12培养，过滤，收集滤液；

S12：离心滤液，弃上清，将离心沉淀下来的细胞DMEM/F12接种于培养瓶中，移入培养箱中进行培养；

S13：当细胞达融合后，用胰蛋白酶不完全消化进行传代纯化，传至第三代后用完全消化进行传代，得到间充质干细胞悬液；

S2：制备胰岛细胞的步骤，其包括：

S21：获得胰腺组织，去除脂肪，再灌注胶原酶，使胰腺组织膨胀；

S22：在胶原酶工作液中水浴膨胀的胰腺组织，剪碎后继续水浴，至胰腺组织被消化；

S23：再用筛网滤过消化组织液，加入高渗枸橼酸盐嘌呤保存溶液，冰浴至胰腺组织中的胰岛细胞全部游离出来；