[发明专利]一种恩替卡韦手性异构体的区分测定方法

说明书

本发明公开一种恩替卡韦手性异构体的区分测定方法，采用手性配体、金属离子与恩替卡韦八个手性异构体形成不同稳定形态的络合物，并利用质谱法对其进行识别区分；其中，手性配体包括R‑贝西沙星、β‑环糊精、米格列醇或头孢噻肟，金属离子包括碱土金属或过渡态金属，碱土金属包括Mg、Ca，过渡态金属包括Ni、Cu、Co、Zn、Mn。该方法快速、简便，克服了传统HPLC法需要特定的手性固定相，溶剂梯度洗脱耗时较长，对映体分离度不够的缺陷；能快速区分恩替卡韦八个手性异构体并进行定量测定。

技术领域

本发明属于质谱分析技术领域，用于药物手性异构体区分，尤其是一种分离恩替卡韦手性异构体的质谱动力学方法。

背景技术

恩替卡韦(entecavir，ETV)是一种环戊基鸟嘌呤核苷类似物，目前该药是慢性乙型肝炎抗病毒治疗的一线药物，其结构中有3个手性中心，可产生8个光学异构体，临床用药为单一异构体(1S,3R,4S)。将(1S,3R,4S)；(1R,3S,4R)；(1S,3S,4R)；(1R,3R,4S)；(1S,3R,4R)；(1R,3S,4S)；(1R,3R,4R)；(1S,3S,4S)这8个构型分别对应编号ETV1；ETV2；ETV3；ETV4；ETV5；ETV6；ETV7；ETV8。ETV1的结构式如下：

根据2015版中国药典中药品杂质分析指导原则的相关内容规定，在单一对映体药物中，可能共存的其他对映体应作为杂质检査进行检测，因此对恩替卡韦手性异构体的分离具有重要意义。目前已有的分离恩替卡韦手性异构体的方法主要是高效液相色谱法，这些方法需要特定的手性固定相，溶剂梯度洗脱耗时较长，而且不能实现恩替卡韦八个手性异构体的分离，特别是对映体分离度不够，对多手性中心药物的分析是手性杂质分离的难点。经文献检索，未见能使恩替卡韦八个手性异构体同时分离的方法报道。本发明旨在建立一种能快速区分恩替卡韦八个手性异构体并进行定量测定的质谱动力学方法，提高其手性异构体之间的分离度。

发明内容

本发明的主要目的是建立提供一种能快速区分恩替卡韦八个手性异构体并实现定量测定的质谱动力学方法，用于恩替卡韦原料药中手性杂质的检测。

为达到上述目的，本发明采用以下技术方案：

一种恩替卡韦手性异构体的区分测定方法，采用手性配体、金属离子与恩替卡韦手性异构体(1S,3R,4S)、(1R,3S,4R)、(1S,3S,4R)、(1R,3R,4S)、(1S,3R,4R)、(1R,3S,4S)、(1R,3R,4R)、(1S,3S,4S)形成不同稳定形态的络合物，并利用质谱法对其进行识别区分；其中，手性配体包括R-贝西沙星、β-环糊精、米格列醇或头孢噻肟，金属离子包括碱土金属或过渡态金属，碱土金属包括Mg、Ca，过渡态金属包括Ni、Cu、Co、Zn、Mn。

进一步地，手性配体为R-贝西沙星，金属离子为Zn。

进一步地，恩替卡韦手性异构体终浓度大于5μg/ml，配置时用甲醇水溶液作为溶剂。

进一步地，质谱的工作条件如下：采用离子阱质谱仪，选择电喷雾离子源，数据通过Compass DataAnalysis软件处理，仪器参数设置：喷雾针电压，-4500V；氮气作为雾化气，压力设为10psi；干燥气速度5.0L/min；气化温度为400℃；干燥气温度为250℃。

进一步地，质谱的进样方法为针泵直接进样。

进一步地，所述质谱工作条件下，样品流速为300μL/h，采用正离子模式，母离子选择二价络合物[Zn²⁺(A)(R-B)₂]²⁺(m/z 564)(A＝恩替卡韦及其手性异构体)，碰撞能量为0.11V，采用MS²模式扫描。

进一步地，所述质谱工作条件下，不同异构体分析时可选择子离子对m/z278/394和733/849。