[发明专利]一种鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法

说明书

技术领域

本发明属于鼻咽癌发病检测技术领域，涉及一种鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法。

背景技术

肽脯氨酰异构酶Pin1是一种高度保守的酶，它能够特异性地识别和结合蛋白磷酸化丝/苏脯胺酰基序。Pin1在很多种肿瘤组织中过表达，调控多种细胞周期蛋白的构象，从而调控细胞的增殖与分化。通过对多种细胞通路的调节，如细胞生长、细胞周期、细胞增殖与分化等，Pin1在肿瘤的发生和发展中起着非常重要的促进作用。前列腺癌Pin1作用于磷酸化的β-catenin而调节着细胞的粘附和运动；在乳腺癌Pin1作用于磷酸化的cyclin D1而调节着细胞周期。此外，Pin1与多种病毒相关，如人免疫缺陷病毒I、卡波西肉瘤病毒、丙型肝炎病毒和人类疱疹病毒等。Pin1可能通过结合EB病毒DNA聚合酶亚基，调节其构象来完成病毒DNA复制。鼻咽癌是与人类EB病毒有关的上皮恶性肿瘤。其发病的人群分布和地区分布极不平衡，发展中国家占全球新发病例的92％。鼻咽癌是中国南部地区最为常见的恶性肿瘤，特别是广东地区，因而又被称为“广东癌”。95％以上的鼻咽癌发生与病毒(EBV)的感染有关，在关于EBV感染的严重程度与鼻咽癌分型的关系研究中显示：鼻咽癌未分化癌的EBV感染浓度滴度最高。Pin1参与鼻咽癌的发生，通过EB病毒和多个致癌信号通路而发挥重要作用。在EB病毒感染的鼻咽癌中，Pin1的过表达能加强癌症的发生和增加其侵袭力。在Pin1启动子区两个位点rs2233678(-842G>C)和rs2233679(-667C>T) 中，仅有其中的一个位点与肿瘤的发病风险相关。因此，很有必要在鼻咽癌高发的广东地区收集较大量的鼻咽癌病人血液、组织样本及临床资料，进一步明确Pin1异构酶启动子的两个多态性位点与鼻咽癌发病风险及临床因素的相关性，以及如何影响Pin1异构酶表达及活性。

综上所述，现有技术存在的问题是：在Pin1启动子区两个位点rs2233678 (-842G>C)和rs2233679(-667C>T)中，仅有其中的一个位点与肿瘤的发病风险相关。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法。

本发明是这样实现的，一种鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法，所述鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法包括以下步骤：

步骤一，血液基因组DNA的提取；

步骤二，PCR技术；

步骤三，限制性片段长度多态性酶切方法分析；

将吸附柱CB3放入收集管中；

所述步骤二具体包括：

(1)普通PCR

①PCR管内加入下列物质，总体积：15μl

②将混合物短暂离心，放入PCR仪，反应条件：

③将PCR产物放入-20℃保存；

(2)酶切实验

①PCR管中加入下列物质，总体积10μl

②将试剂混匀后，短暂离心，置37℃水浴3h后，-20℃保存；

水平式琼脂糖凝胶电泳法检测酶切产物。

进一步，所述步骤四之后用平均值±标准差表示；Pin1两多态性位点基因型的分布和等位基因的频率在鼻咽癌病人组和正常人对照组中的比较采用卡方检验；两多态性位点与鼻咽癌发病风险的相关性采用的是多元回归分析，用OR 值和95％CI值表示；两位点与鼻咽癌临床因素关系分析采用卡方检验和Fisher’s 确切概率法；采用连锁不平衡检测两位点，并用在线的SHEsis单体型分析两位点单倍体与鼻咽癌发病风险的关系。

本发明的优点及积极效果为：在广东地区收集鼻咽癌病人及正常人血细胞标本各800例(广东医科大学附属医院、南方医科大学附属南方医院提供)，分析Pin1启动子多态性与鼻咽癌发病风险，人类基因组DNA提取剂盒提取各样本DNA，Sac I酶和Ban II酶酶切后电泳。

附图说明

图1是本发明实施例提供的鼻咽癌发病风险关联检测的分子方法流程图。

图2是本发明实施例提供的Pin1两多态性位点的连锁不平衡示意图；

图中：(A)D′值；图(B)r²值。

图3是本发明实施例提供的干扰AP2α之后Pin1的mRNA水平是下降示意图。

图4是本发明实施例提供的在蛋白水平上AP2α调节Pin1水平示意图。