[发明专利]大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法

权利要求书

1.一种大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，包括如下步骤：

A、选择抽出新叶数量较多的大叶紫金牛单株，从中选择叶龄9-10天的新叶，截取茎尖部位的幼嫩叶片，经消毒处理后，切成0.8-1.0cm的小段，获得无菌外植体；

B、将步骤A得到的无菌外植体接种到诱导培养基中，在培养温度24-26℃，光照强度1500lux，光照时间10-12h/d的条件下培养25d，获到无菌试管苗；

C、将步骤B中得到的无菌试管苗切成1.0-2.0cm的小段，并接种到增殖培养基中，在培养温度24-26℃，光照强度1500lux，光照时间10-12h/d的条件下培养30d，获得不定芽，其中，所述增殖培养基是以MS为基本培养基，并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、0.5-2.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.3-0.5mg/L的灵发素和0.2-0.8mg/L的吲哚丁酸，pH值为5.8；

D、将步骤C中得到的不定芽切成带顶芽或叶芽的茎段，并接种到生根培养基中，在培养温度24-26℃，光照强度1500lux，光照时间为10-12h/d的条件下培养30d，得到完整的带根苗，其中，所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基，并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、0.1-1.0mg/L的多效唑、0.1-0.3mg/L的吲哚丁酸和1.0-2.0mg/L的萘乙酸，培养基pH值为5.8；

E、在室温为23-25℃的室内将步骤D得到的带根苗的瓶盖打开，并在瓶中加入少量炼苗液淹没所述生根培养基，炼苗3-5d后，用镊子将带根苗取出，洗净根部培养基，并移栽到育苗大棚内的育苗基质中继续培养40d，得大田移栽苗；

步骤B中，所述诱导培养基是以MS为基本培养基，并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.4mg/L激动素和0.1mg/L的萘乙酸，pH值为5.8；

步骤E中，所述炼苗液的制备方法为：将6.0-8.0mg的纳米氧化锌加入1L的磁化水中，初混后，将其置于200的高斯磁场中磁化处理8h，即得。

2.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤A中，所述消毒处理是将截取的茎尖部位的幼嫩叶片置于质量百分数为0.05％洗洁精水溶液浸泡5min，经流水冲洗15min，再移置于超净工作台上，用添加了2-3滴吐温-20的质量百分数为0.1％升汞消毒8-10min，然后用无菌水冲洗3-5次，并用无菌吸水纸吸干表面水分。

3.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤C中，所述增殖培养基是以MS为基本培养基，并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、1.0mg/L的6-苄基腺嘌呤、0.4mg/L的灵发素和0.8mg/L的吲哚丁酸，pH值为5.8。

4.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤D中，所述生根培养基是以1/2MS为基本培养基，并添加30g/L蔗糖、3.5g/L琼脂、1g/L活性炭、1.0mg/L的多效唑、0.3mg/L的吲哚丁酸和1.5mg/L的萘乙酸，培养基pH值为5.8。

5.如权利要求1所述的大叶紫金牛叶片的组织培养快速繁殖方法，其特征在于，步骤E中，所述育苗基质由泥炭土和细河沙按照重量比3:1混合制得；培养条件为：培养温度25-30℃，相对湿度为85-95％，遮光度60-75％。