[发明专利]一种春雷霉素的纯化方法

权利要求书

1.一种春雷霉素的纯化方法，其特征在于，所述的方法包括如下步骤:

1)含有春雷霉素的清液制备：用盐酸将链霉菌发酵液的pH调至3.0～4.0；然后向发酵液中加入高岭土助滤剂搅拌并静置，固液分离过滤得清液，所述高岭土助滤剂的加入量占链霉菌发酵液重量比的0.1％；

2)层析介质预处理：将酸液浸泡活化的阳离子交换树脂装柱，用去离子水将阳离子交换树脂洗涤至中性，然后再用pH为11的氨水洗涤直至流出液的pH为10～11，再用去离子水将阳离子交换树脂洗涤至中性备用；

3)上样：将步骤1)中的清液通过步骤2)预处理后的层析介质，再用0.01mol/L盐酸洗脱3～5个柱体积；

4)洗脱：将步骤3)上完样的层析柱用0.01mol/L～0.1mol/L氨水洗脱，先用氨水洗脱2～3个柱体积，然后继续解析，收集含有春雷霉素的第4～8个柱体积的解析液，再用盐酸将解析液的pH调至3.5～4.5；

5)浓缩结晶：将步骤4)制备的解析液用截留分子量不大于200的聚醚砜纳滤膜进行浓缩，待浓缩至原体积十分一后按一比一体积加入pH为4的盐酸水洗2～3次以除去多余的铵盐，继续浓缩并降温或者加入有机溶剂直至春雷霉素完全结晶析出，固液分离得到白色结晶物即为春雷霉素。

2.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤1)静置时间为20min。

3.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤1)搅拌时间为10min。

4.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤2)浸泡阳离子交换树脂的酸液pH为1.0。

5.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤2)所述的阳离子交换树脂为磺酸根强阳离子交换树脂或者上海华震树脂科技有限公司生产的HZ008型号阳离子交换树脂。

6.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤3)协调控制以下三个参数：清液通过层析介质的流速、阳离子交换树脂的使用量、层析柱的连接方式，避免清液因接近吸附或操作不当饱和时流出层析柱。

7.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤5)中当春雷霉素浓缩60mg/ml～100mg/ml时采取降温的方式结晶析出春雷霉素。

8.如权利要求1所述的春雷霉素的纯化方法，其特征在于，步骤5)中当春雷霉素浓缩40mg/ml～100mg/ml时采取加入乙醇或丙酮有机溶剂结晶析出春雷霉素。