[发明专利]一种春雷霉素的纯化方法

说明书

本发明提供一种春雷霉素的纯化方法，所述的方法包括如下步骤:1)含有春雷霉素的清液制备；2)层析介质预处理；3)上样；4)洗脱；5)浓缩结晶。采用本发明纯化春雷霉素，具有纯度高、收率高、绿色环保的有益效果。

技术领域

本发明涉及微生物源生物杀菌剂领域，特别涉及一种春雷霉素的纯化方法。

背景技术

春雷霉素是放线菌产生的代谢产物，属内吸抗生素，兼有治疗和预防作用，纯品为白色针状结晶固体，在常温下稳定，在酸性和中性条件下稳定，在碱性条件下易分解。春雷霉素是防治多种细菌和真菌性病害的理想药剂，有预防、治疗、生长调剂功能。它既是防治稻瘟病的专用抗生素外，还对水稻细条病，柑橘流胶病，砂皮病，猕猴桃溃疡病，辣椒细菌性疮痂病，芹菜早疫病，菜豆昏枯病，菱白胡麻斑病，黄瓜炭疽病、细菌性角斑病、西红柿叶霉病、灰霉病，甘蓝黑腐病、黄瓜枯萎病等有好的防治效果。

在CN201410707264.0《一种春雷霉素发酵培养基及发酵方法》中也公开了一种发酵培养基及发酵方法，从中可以知道，为了达到工业化规模生产，在大的发酵罐中都需要加入不同类型的表面活性剂和消泡剂等，同时培养基中也含有大量营养物如豆饼粉、豆油、玉米淀粉、淀粉酶等，这些经过微生物代谢，会产生复杂的初级代谢产物如核苷酸类、氨基酸等，也产生水溶性的胞外次级代谢产物目标物春雷霉素和他复杂代谢物色素等。在CN201610504642.4《一种利用春雷霉素发酵液提取盐酸春雷霉素的方法》中公开了一种制备方法其是通过：分两阶段调节pH-5及pH2.5-3,然后再加入聚硅氯化铝钙，静置后通过陶瓷膜过滤和大孔吸附树脂脱色以及纳滤浓缩最后结晶得到固体盐酸春雷霉素，大部分链霉菌发酵都有色素等杂质产生，一些产品由于次级代谢产物调控的差异会产生结构类似物的目标产物同系物，造成产品纯度要求高的情况下需要采取不同的纯化工艺获得高纯度目标物。本领域的技术人员知道，一般微生物发酵产物的复杂性，决定下游提取纯化工艺的不同，在CN201610504642.4陶瓷膜过滤获得含有春雷霉素的发酵清液，在CN201110149011.2《一种春雷霉素原药制备方法》中也公开了传统工艺方法步骤如：

发酵液通过盐酸或者草酸调节pH3-3.5，然后板框或者超滤膜在65-70℃下过滤去除菌丝及部分蛋白质，收集滤液，然后用树脂吸附滤液中的有效成分，除去其他可溶杂质，同时后续用氨水作为洗脱液从树脂上提取出有效成分，再用脱盐树脂脱去铵离子得到较纯净的春雷霉素溶液，后续用真空薄膜蒸发器或纳滤膜进行浓缩至含量6％左右，最后用喷雾干燥或者乙醇结晶制得春雷霉素原药，其公开也指出传统生产工艺纯度虽然高，但收率低只有50-60％左右，该发明人认为适于医用但不适于农用，一些工艺改进去除了树脂纯化和浓缩工序，直接在过滤后处理进行喷雾干燥，由于发酵产物复杂，发酵过程中留下的少量可溶性残糖、氨基酸、蛋白质等杂质，因此，喷雾干燥过程中，上述物质遇热融化变粘，紧贴于干燥塔塔壁上无法排出，造成喷雾干燥过程无法顺利收集原药，不能实现工业规模生产。该发明人对该方法进行过多次实验，实际收率不超过50％；其后该发明人进行改进在对除菌体后的过滤液中加入其他辅料辅助喷雾工艺，提高了产品收率最高到75％，春雷霉素的质量百分比在4％-63.5％之间。

由上背景对比，本发明的技术不同于上述的技术操作，得到的有益效果，产品纯度高，可以为其他医药用途提供低廉高品质原料。产品收率提高，这个工序操作虽然会有部分废水产生，但在整体工业生产中可以经过回收套用等步骤节约用水，产生的废水量不高，使用的工艺都是低能耗的绿色生产工艺技术—膜过滤，溶剂选用亲和性的绿色可再生乙醇。本发明的生产收率和纯度优于传统技术工艺。

发明内容

为了解决背景技术中的技术问题，本发明是这样实现的：

一种春雷霉素的纯化方法，所述的方法包括如下步骤:

1)含有春雷霉素的清液制备：用盐酸将链霉菌发酵液的pH调至3.0～4.0；然后向发酵液中加入高岭土助滤剂搅拌并静置，固液分离过滤得清液；