[发明专利]一种芜菁萝卜属间异源多倍体的诱导制备方法

说明书

本发明涉及一种芜菁萝卜属间异源多倍体的诱导制备方法，取芜菁萝卜属间远缘双单倍体杂种无性苗的幼芽接种于培养基中培养，得到扩繁的无性幼芽；取幼芽接种于含0.02wt％秋水仙碱的诱导培养基上进行培养，得到诱导后的幼芽；将诱导后的幼芽转入到分化培养基中进行后继培养，得到幼苗；对幼苗的幼嫩叶片进行流式细胞仪倍性分析，以芜菁萝卜双单倍体杂种的二倍体母本芜菁、父本萝卜，以及经过细胞学鉴定的芜菁萝卜双单倍体杂种为对照，峰值与对照相近的为二倍体，出现显著单个高峰的为整倍体，出现两个或多个高度相近分离峰的为混倍体。该方法操作方便，倍性鉴定效率高，解决了现有技术中芜菁萝卜属间双单倍体杂种不育，无法进行遗传和育种利用的问题。

技术领域

本发明涉及一种芜菁萝卜属间异源多倍体的诱导制备方法，属于植物的多倍体育种领域。

背景技术

芜菁是十字花科芸薹属芸薹种芜菁亚种，肥大肉质根供食用，肉质根柔嫩、致密，供炒食、煮食。对环境的适应性很强，产量较高，是具有较长食用历史的传统蔬菜之一。萝卜原产于我国，是十字花科萝卜属，以肉质根供食用，是主要的根茎类蔬菜之一，其营养丰富、管理简便、产量高、成本低，供应期长，产品耐贮运，用途广，不仅可以食用，还可加工，并且具有较高的食疗作用。以芜菁为母本，萝卜为父本创制的异源属间双单倍体，由于在减数分裂过程中染色体不能正常的配对和分离，远缘杂种往往表现高度不育；限制了其进一步的改良和育种利用。

异源多倍体育种是植物创新育种的一种手段，通过染色体加倍技术，人工创造多倍体，是获得高生物质产量植物新品种的有效途径之一。已有研究表明，秋水仙素可应用于芸薹属植物的染色体加倍中，但在远缘杂交过程中利用秋水仙碱诱导染色体加倍仍然存在瓶颈现象，而且针对不同材料，采用不同的处理方式进行秋水仙碱诱导染色体加倍的具体效果不同。

发明内容

本发明的目的是解决现有技术中芜菁萝卜属间双单倍体杂种不育，无法进行遗传和育种利用的问题，提供一种芜菁萝卜属间异源多倍体的诱导制备方法。

本发明的另一个目的还在于提供一种芜菁萝卜属间异源多倍体的倍性鉴定方法。

技术方案

一种芜菁萝卜属间异源多倍体的诱导制备方法，包括如下步骤：

(1)取芜菁萝卜属间远缘双单倍体杂种无性苗的幼芽接种于培养基中，培养15-30d，得到扩繁的芜菁萝卜属间远缘双单倍体无性幼芽；

(2)将经过扩繁的芜菁萝卜属间远缘双单倍体无性幼芽，接种于含0.02wt％秋水仙碱的诱导培养基上，培养18-36小时后，得到诱导后的幼芽；

(3)将诱导后的幼芽转入分化培养基中进行后继培养，得到幼苗；

(4)取后继培养后的幼苗的幼嫩叶片进行流式细胞仪倍性分析，以芜菁萝卜双单倍体杂种的二倍体母本芜菁、父本萝卜，以及经过细胞学鉴定的芜菁萝卜双单倍体杂种为对照，峰值与对照相近的为二倍体，出现显著单个高峰的为整倍体，出现两个或多个高度相近分离峰的为混倍体。

步骤(1)中，所述培养基的配方为：MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/L NAA+2％蔗糖+0.7％琼脂。

步骤(2)中，所述诱导培养基配方为：0.02wt％秋水仙碱+MS+1mg/L 6-BA+0.1mg/LNAA+2％蔗糖+0.7％琼脂。

步骤(3)中，所述分化培养基的配方为：MS+1mg/L 6-BA+0.5mg/L NAA+2％蔗糖+0.7％琼脂。

步骤(3)中，所述后继培养的时长为20-35d，温度为25℃，光照时间16h/d，光照强度为2000lx。

上述方法制得的芜菁萝卜属间异源多倍体的倍性鉴定方法，包括如下步骤：