[发明专利]一种检测环境中真菌毒素的方法

权利要求书

1.一种检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，具体步骤如下：

1）用荧光染料标记从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段，得到荧光染料标记的aptamer识别探针，将荧光染料标记的aptamer识别探针加入待测样品中，aptamer与待测真菌毒素赭曲霉素A配体特异结合，其中，荧光染料标记的aptamer识别探针过量；

2）用生物素标记从核酸分子文库中得到的寡核苷酸片段互补碱基即aptamer’，再用磁性纳米颗粒修饰，得到纳米颗粒修饰的捕获探针；

3）将纳米颗粒修饰的捕获探针加入到待测样品中，未反应的aptamer识别探针与磁性纳米颗粒修饰的捕获探针发生杂交反应；磁性分离后，通过测定上清液中荧光信号强弱判断与aptamer结合的真菌毒素赭曲霉素A的量；

4）通过磁性分离后的杂交体，解链，水洗，再磁性分离，即可实现纳米颗粒修饰的捕获探针的再生。

2.根据权利要求1所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，步骤1）的具体过程为：在反应瓶中加入80μL tris结合缓冲液，加入8μL 25μM aptamer识别探针，加入8μL 25μM 2*10^-10mol的OTA溶液，45℃，反应20min。

3.根据权利要求1所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，步骤2）的具体过程为：在反应瓶中加48μL 10mg/mL的链霉亲和素修饰的磁性纳米颗粒，加入8μL 25μM的生物素标记的捕获探针，37℃下，反应30min，得到磁性纳米颗粒修饰的捕获探针NP-aptamer’。

4.根据权利要求1所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，步骤3）的具体过程为：加入制备好的56μL 纳米颗粒修饰的捕获探针，30℃下杂交50min；置于磁力架上进行磁分离，弃上清，并用上样缓冲液淋洗；测定上清液的荧光强度。

5.根据权利要求1或4所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，步骤3）中，用荧光分光光度计测量，最大吸收：490-495nm，最大发射：520-530nm，测定荧光强度。

6.根据权利要求1所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，步骤4）的具体过程为：将移去上清液只剩瓶底的杂交体加入300μL tris结合缓冲溶液摇匀，放入45℃的恒温摇床里解链30min，取出样品，再利用磁铁在瓶底吸附，水洗3次，弃上清液，瓶底即为回收的磁性纳米颗粒修饰的捕获探针。

7.根据权利要求2所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，tris结合缓冲溶液的配置：50mL 0.1mol/L的三羟基氨基甲烷溶液，0.60565g的三羟基氨基甲烷固体加水50mL，与42mL 0.1mol/L的盐酸，9mL的浓盐酸加1000mL的水，再加入约1mL的吐温20再定容到lL。

8.根据权利要求2所述的检测环境中真菌毒素的方法，其特征在于，OTA溶液的配置：样品中加入5mL甲醇，配制成1.0g/L的标准溶液；取1009μL 1.0g/L的标准溶液定容到100 mL的容量瓶中，得到100mL 25μM的OTA使用液。