[发明专利]一种汉中防已组织培养方法

权利要求书

1.一种汉中防已组织培养方法，其特征在于包括以下步骤：

（1）芽诱导培养：以汉中防已带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成4厘米长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用76%乙醇消毒32s后用无菌水洗4次，再用0.15%升汞溶液消毒28min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3100lx条件下培养35天，统计其芽诱导率及生长情况；

（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，置于培养温度为25℃的条件下培养27天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；

（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为7cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3600lx，培养温度为25℃的条件下培养38天后统计生根情况；

（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝1:3混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽。

2. 根据权利要求1所述的一种汉中防已组织培养方法，其特征在于步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+3mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

3. 根据权利要求1所述的一种汉中防已组织培养方法，其特征在于步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/LNAA+8mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

4. 根据权利要求1所述的一种汉中防已组织培养方法，其特征在于步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。