[发明专利]一种汉中防已组织培养方法

说明书

技术领域

本发明涉及植物生物技术中植物组织培养的方法，具体地说，涉及一种汉中防已组织培养方法。

背景技术

汉中防已为马兜铃科植物，主产陕西汉中地区。此外，湖北、湖南、四川、云南等地。四季均可采收，但以科季采挖者为好。挖取根后去净泥沙及须根，刮去或不刮去栓皮，晒至半干，直径在2.5cm以上对半劈开，晒干即可。药材性状：根呈圆柱形，多少弯曲，弯曲处有深陷横沟，长6~15cm，直径1.5~3cm。外皮浅棕色或淡棕黄色，刮去外皮为浅灰黄色。质坚实，不易断，断面不平坦，刺状，横切面灰白色至黄白色，粉性，皮部较厚，木部束灰黄色，呈放射状排列。味苦，微涩。以块大、皮厚、富粉性者为佳。主要成份：含马兜铃酸，ϐ-谷甾醇， 木兰花碱，尿囊素等。功用主治：祛风利水，除湿镇痛。用于头面四肢水肿，腰膝关节疼痛等。目前，汉中防已主要采用扦插殖，但成活率低，远远不能满足大规模生产对汉中防已种苗的需要。并且，种子繁殖后代之间在药效成分均存差异，不利于优良品种的推广。利用植物组织培养技术能有效解决濒危珍稀物种拯救和野生植物资源匮乏的问题。因此建立汉中防已组织培养技术，为其大规模工厂化生产奠定基础，是当前急需解决的问题，也是解决市场需求的一大办法。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以汉中防已带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了汉中防已的离体再生。种子发芽率高，种苗粗壮，生长快速，收益大的一种汉中防已组织培养方法。

本发明的一种汉中防已组织培养方法，其特征在于包括以下的步骤：

（1）芽诱导培养：以汉中防已带芽茎段作为外植体，剪去叶片，切成4厘米长的带有3个腋芽的节段先用洗衣粉溶液浸泡10min，再用毛刷刷洗外植体表面将其表面的尘土和部分菌体去除，然后用自来水冲洗4h后置于超净工作台中，先用76%乙醇消毒32s后用无菌水洗4次，再用0.15%升汞溶液消毒28min，用无菌水冲洗6次再用无菌滤纸擦干表面的水珠后接种到芽诱导培养基进行芽诱导，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3100lx条件下培养35天，统计其芽诱导率及生长情况；

（2）增殖培养：将步骤（1）培养得到的生长正常、有明显茎、叶结构的芽体切下并转入增殖培养基上进行继代培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为2600lx，置于培养温度为25℃的条件下培养27天后观察生长情况和芽增殖情况，多次反复切割芽体进行继代培养，得到丛生芽；

（3）生根培养：将步骤（1）或（2）过程获得的高度约为7cm、生长良好、无褐化、玻璃化和白化现象的不定芽分切接种到生根培养基上进行生根培养，接种后先在25℃条件下全暗培养6天，然后置于每天光照16小时，光照强度为3600lx，培养温度为25℃的条件下培养38天后统计生根情况；

（4）炼苗移栽：将步骤（3）获得的高约8cm的生长良好且健壮的生根试管苗去瓶盖置于自然光照下炼苗8天后，将试管苗从培养瓶中取出，洗掉根部培养基，栽入由营养土：珍珠岩＝1:3混合成的基质,置于光照培养箱内培养，每天以1/2MS大量元素营养液给幼苗浇水，保持湿度，待幼苗成活后再移栽。

步骤（1）所述的芽诱导培养基为：MS+6mg/L6-BA+3mg/L NAA+31g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤（2）所述的增殖培养基为：MS+1.2mg/LNAA+8mg/L 6-BA+32g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

步骤（3）所述的生根培养基为：1/4MS+1.0mg/L NAA+1.0mg/L IBA+31g/L蔗糖+6.0g/L琼脂，pH为5.8。

与现有技术相比本发明的优点是：本发明通过植物组织培养技术短时间内快速获得大量汉中防已优良品种苗木的方法。以汉中防已带芽茎段为外植体，经过芽诱导、芽增殖培养、生根培养、炼苗及移栽等过程实现了汉中防已的离体再生，为其大量选育、快速繁殖、新品种推广提供技术支持。技术方法简单，操作容易，种子发芽率高，种苗生长良好，产量高。

具体实施方式

以下实施例是对本发明的进一步说明，不是对本发明的限制。

实施例1