[发明专利]一种大花蕙兰倍数体化生产方法

权利要求书

1.一种大花蕙兰倍数体化生产方法，包括下列步骤：

(1)将经过无菌播种形成的大花蕙兰原球茎，在原球茎开始萌发有芽尖冒出但是新芽还没有长成时1-4天内，切除萌发的芽尖后将原球茎移植到PG液体培养基中；

(2)将移植好的原球茎烧瓶放在培养架上的震荡器的苗床上震荡，光照下培养，培养条件为：温度：22-25℃，光照强度：2000-2800lx，每日光照16小时；

(3)按步骤(2)所述方法培养7日后，用5ml的注射器吸入秋水仙素原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的秋水仙素原液1～2ml到液体培养基中；

(4)用5ml的注射器吸入萘乙酸原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的萘乙酸原液1～2ml到液体培养基中；

(5)用5ml的注射器吸入6-苄氨基腺嘌呤原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的6-苄氨基腺嘌呤原液1～2ml到液体培养基中；

(6)依次添加完秋水仙素原液、萘乙酸原液和6-苄氨基腺嘌呤原液后，密封烧瓶，将原球茎烧瓶放在培养架上的震荡器的苗床上震荡，光照下培养，培养条件为：温度：22-25℃，光照强度：2000-2800lx，每日光照16小时；

(7)按步骤(6)所述方法培养7日后，将烧瓶中的原球茎过滤取出，用无菌水将残存的秋水仙素、萘乙酸原液和6-苄氨基腺嘌呤原液洗净；

(8)将洗净后的原球茎移植到CS固体培养基中进行培养，培养条件为：温度：24-25℃，光照强度：2000-2800lx,每日光照16小时进行培养，培养2个月后即可萌发出4倍体的大花蕙兰新苗。

2.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述PG液体培养基的PH值为5.8，其包括下列成分：RO纯水、浓度为2g/L的花宝一号、浓度为1g/L的植物蛋白胨，浓度为20g/L的蔗糖分析纯、浓度为2g/L的椰子水、浓度为3g/L的结冷胶。

3.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述秋水仙素原液的配制方法包括下列步骤：

(1)称量1.7g氯化钠分析纯,放入100ml纯水中,搅拌至氯化钠完全溶解；

(2)称量1.0g秋水仙素分析纯，放入步骤(1)所述的氯化钠溶液中，搅拌至秋水仙素完全溶解；

(3)向步骤(2)制成的溶液中追加放入纯水，充分搅拌，最后溶液定容至200ml，50倍的秋水仙素原液配制完成，将其遮光低温冷藏待用。

4.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述萘乙酸原液的配制方法包括下列步骤：

(1)称量100mg萘乙酸分析纯，量取1N浓度的稀盐酸溶液5ml，将萘乙酸分析纯放入量取的稀盐酸溶液中，搅拌至萘乙酸完全溶解。

(2)量取50ml纯水，将步骤(1)制成的萘乙酸的盐酸溶液加入其中，搅拌，向溶液中添加纯水，最后溶液定容至100ml，100倍的萘乙酸原液配制完成，将其低温冷藏待用。

5.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述6-苄氨基腺嘌呤的配制方法包括下列步骤：

(1)称量100mg的6-苄氨基腺嘌呤分析纯，量取5ml的无水酒精分析纯，将6-苄氨基腺嘌呤放入量取的无水酒精中，搅拌至6-苄氨基腺嘌呤完全溶解；

(2)量取50ml纯水，将6-苄氨基腺嘌呤的溶液加入其中，搅拌，向溶液中添加纯水，最后溶液定容至100ml；100倍的6-苄氨基腺嘌呤原液配制完成，将其低温冷藏待用。

6.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述注射器经103.4KPa高压蒸汽灭菌20min。

7.根据权利要求1所述的一种大花蕙兰倍数体化生产方法，其特征在于：所述一次性水系针头过滤器经103.4KPa高压蒸汽灭菌20min。