[发明专利]一种大花蕙兰倍数体化生产方法

说明书

技术领域：

本发明涉及兰花种植技术领域，特别涉及一种大花蕙兰倍数体化生产方法。

背景技术：

兰花是一种姿态优美，芳香馥郁的珍贵花卉，属中国传统十大名花之一。大花蕙兰作为重要的商品盆花和切花之一，倍受人们青睐。多倍体植株茎秆粗壮，生长坚实，耐倒伏，叶片增厚增宽，绿色加深，光合作用增强，增加新的纹饰特征、花朵比较大且紧凑，花期长而迟。这些特征大大提高了花卉的产量与质量，增加了花卉的观赏价值和商品价值，所以多倍体育种在花卉上有广泛的应用。在自然条件下，由于外界环境的变化和遗传结构的不稳定性，植物本身会发生自发突变，然而这类突变发生的频率极低，并因植物种类和基因的不同而存在差异。自然界中植株变异率极低，远远不能够满足兰花育种工作的需要，化学诱变育种是目前一种迅速发展的作物育种技术。现有的倍数体技术一般是在开花株苗新生长点的地方放置一个小棉球，每天将配制的秋水仙素滴在棉花球上，连续处理2周左右时间。这种技术成功率不高，而且费时费力。

公开于该背景技术部分的信息仅仅旨在增加对本发明的总体背景的理解，而不应当被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种大花蕙兰倍数体化生产方法，从而克服上述现有技术中的缺陷。

为实现上述目的，本发明提供一种大花蕙兰倍数体化生产方法，包括下列步骤：

(1)将经过无菌播种形成的大花蕙兰原球茎，在原球茎开始萌发有芽尖冒出但是新芽还没有长成时1-4天内，切除萌发的芽尖后将原球茎移植到PG液体培养基中；

(2)将移植好的原球茎烧瓶放在培养架上的震荡器的苗床上震荡，光照下培养，培养条件为：温度：22-25℃，光照强度：2000-2800lx，每日光照16小时；

(3)按步骤(2)所述方法培养7日后，用5ml的注射器吸入秋水仙素原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的秋水仙素原液1～2ml到液体培养基中；

(4)用5ml的注射器吸入萘乙酸原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的萘乙酸原液1～2ml到液体培养基中；

(5)用5ml的注射器吸入6-苄氨基腺嘌呤原液，加装Ф13mm/0.22um一次性水系针头过滤器，添加过滤除菌后的6-苄氨基腺嘌呤原液1～2ml到液体培养基中；

(6)依次添加完秋水仙素原液、萘乙酸原液和6-苄氨基腺嘌呤原液后，密封烧瓶，将原球茎烧瓶放在培养架上的震荡器的苗床上震荡，光照下培养，培养条件为：温度：22-25℃，光照强度：2000-2800lx，每日光照16小时；

(7)按步骤(6)所述方法培养7日后，将烧瓶中的原球茎过滤取出，用无菌水将残存的秋水仙素、萘乙酸原液和6-苄氨基腺嘌呤原液洗净；

(8)将洗净后的原球茎移植到CS固体培养基中进行培养，培养条件为：温度：24-25℃，光照强度：2000-2800lx,每日光照16小时进行培养，培养2个月后即可萌发出4倍体的大花蕙兰新苗。

优选的，技术方案中，所述PG液体培养基的PH值为5.8，其包括下列成分：RO纯水、浓度为2g/L的花宝一号、浓度为1g/L的植物蛋白胨，浓度为20g/L的蔗糖分析纯、浓度为2g/L的椰子水、浓度为3g/L的结冷胶。

优选地，技术方案中，所述秋水仙素原液的配制方法包括下列步骤：

(1)称量1.7g氯化钠分析纯,放入100ml纯水中,搅拌至氯化钠完全溶解；

(2)称量1.0g秋水仙素分析纯，放入步骤(1)所述的氯化钠溶液中，搅拌至秋水仙素完全溶解；

(3)向步骤(2)制成的溶液中追加放入纯水，充分搅拌，最后溶液定容至200ml，50倍的秋水仙素原液配制完成，将其遮光低温冷藏待用。

优选地，技术方案中，所述萘乙酸原液的配制方法包括下列步骤：

(1)称量100mg萘乙酸分析纯，量取1N浓度的稀盐酸溶液5ml，将萘乙酸分析纯放入量取的稀盐酸溶液中，搅拌至萘乙酸完全溶解。

(2)量取50ml纯水，将步骤(1)制成的萘乙酸的盐酸溶液加入其中，搅拌，向溶液中添加纯水，最后溶液定容至100ml，100倍的萘乙酸原液配制完成，将其低温冷藏待用。

优选地，技术方案中，所述6-苄氨基腺嘌呤的配制方法包括下列步骤：