[发明专利]复方大黄清胰汤指纹图谱的建立方法

权利要求书

1.一种复方大黄清胰汤指纹图谱的建立方法，其特征在于：它包括以下步骤：

步骤一，所述供试品溶液的制备为精密量取复方大黄清胰汤剂5 mL于50 mL离心管中，加入甲醇25 mL，称定重量，超声处理30 min，放冷，甲醇补足减少的重量，3500 r/min 离心10 min，取全部上清，挥去溶剂，残渣加甲醇溶解并定容至5 mL ，摇匀，用0.22 μm微孔滤膜滤过，取续滤液作为供试品溶液；同法分别制备大黄、赤芍、木香、丹皮、厚朴、栀子、延胡索单味药材供试品溶液；

步骤二，所述对照品溶液的制备为分别取栀子苷、芍药苷、丹皮酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、延胡索乙素对照品适量，精密称定，分别加甲醇溶液制成每1 mL含栀子苷、芍药苷、丹皮酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、延胡索乙素1 mg的单个对照品母液，再分别精密取上述对照品母液适量，加甲醇溶液制得每1 mL含栀子苷、芍药苷、丹皮酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、和厚朴酚、厚朴酚、木香烃内酯、去氢木香烃内酯、延胡索乙素分别为6～100μg的混合对照品溶液；

步骤三，对供试品溶液和混合对照品溶液进行高效液相色谱分析；分别精密吸取样品溶液与参照物溶液各10μL，注入液相色谱仪测定，记录150min图谱；高效液相色谱条件如下：

色谱柱：UItimate LP-C18 色谱柱，250 mm×4.6 mm，5 μm；

检测器：二极管阵列检测器或紫外检测器；

流动相A和B分别为，乙腈和0.1v/v％磷酸水溶液；

流动相进行梯度洗脱，洗脱程序以如下体积浓度配制进行：

0～10 min，2%～10% 流动相A，98%～90% 流动相B；

10～100 min，10%～30%流动相 A,90%～70% 流动相B；

100～130 min，30%～55%流动相 A，70%～45% 流动相 B；

130～150 min，55%～85% 流动相A，45%～15% 流动相B；

流速为1.0 ml/min；

柱温为30 ℃；

检测波长为327 nm；

步骤四，将步骤三得到的色谱数据导入“中药色谱指纹图谱相似度评价系统”，进行多点校正、谱峰匹配，并生成对照特征图谱，计算相似度，其指纹图谱特征在于：含有42个共有峰，其中11、13、23、31、36、37、38、39、40、41、42号峰，分别为栀子苷、芍药苷、延胡索乙素、丹皮酚、芦荟大黄素、大黄酸、大黄素、和厚朴酚、去氢木香烃内酯、厚朴酚、大黄酚，其保留时间分别为26.184±0.085 min、33.525±0.136 min、58.342±0.307 min、93.147±0.284min、114.825±0.255 min、120.578±0.120、132.655±0.100 min、134.646±0.055 min、137.236±0.066 min、138.921±0.042 min、141.183±0.073 min；复方大黄清胰汤剂指纹图谱特征共有峰还包括1号峰、2号峰、3号峰、4号峰、5号峰、6号峰、7号峰、8号峰、9号峰、10号峰、12号峰、14号峰、15号峰、16号峰、17号峰、18号峰、19号峰、20号峰、21号峰、22号峰、24号峰、25号峰、26号峰、27号峰、28号峰、29号峰、30号峰、32号峰、33号峰、34号峰、35号峰，其保留时间分别为9.480±0.092 min、12.480±0.049 min、13.940±0.043 min、14.784±0.039 min、15.319±0038 min、15.635±0.050 min、15.930±0.096 min、17.818±0.058min、20.684±0.099 min、21.139±0.073 min、29.832±0.112min、38.848±0.147 min、43.836±0.187 min、44.764±0.170 min、47.082±0.240 min、50.097±0.187 min、50.931±0.114 min、53.425±0.139 min、55.379±0.274 min、56.877±0.158 min、60.651±0.498 min、64.134±0.129 min、69.730±0.313 min、75.022±0.199 min、83.640±0.115 min、84.596±0.242 min、86.764±0.130 min、95.933±0.089 min、98.745±0.108 min、101.488±0.094 min、111.159±0.030 min。