[发明专利]一种利用D‑阿拉伯糖生产D‑1,2,4‑丁三醇的基因工程菌及其构建方法与应用在审
| 申请号： | 201710977497.6 | 申请日： | 2017-10-17 |
| 公开（公告）号： | CN107699534A | 公开（公告）日： | 2018-02-16 |
| 发明（设计）人： | 陈可泉;胡社伟;王昕;许娜娜;高倩;姜明均;欧阳平凯 | 申请（专利权）人： | 南京工业大学 |
| 主分类号： | C12N1/21 | 分类号： | C12N1/21;C12N15/70;C12P7/18;C12R1/19 |
| 代理公司： | 南京苏高专利商标事务所(普通合伙)32204 | 代理人： | 丁静静,肖明芳 |
| 地址： | 210009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 利用 阿拉伯糖 生产 丁三醇 基因工程 及其 构建 方法 应用 | ||
1.一种利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌，其特征在于，在宿主菌中表达D-阿拉伯糖脱氢酶、D-阿拉伯糖酸脱水酶、2-酮酸脱羧酶和醇脱氢酶。
2.根据权利要求1所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌，其特征在于，所述的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。
3.根据权利要求1所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌，其特征在于，所述的D-阿拉伯糖脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，D-阿拉伯糖酸脱水酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.2所示，2-酮酸脱羧酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.3所示，醇脱氢酶的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。
4.权利要求1所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：
(1)将D-阿拉伯糖脱氢酶、D-阿拉伯糖酸脱水酶、2-酮酸脱羧酶、醇脱氢酶克隆到表达质粒中，得到重组质粒；
(2)将重组质粒转化宿主菌，既得到利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌。
5.根据权利要求4所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，所述的表达质粒为PRSF-duet-1或PET-duet-1。
6.根据权利要求4所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(2)中，所述的宿主菌为大肠杆菌BL21(DE3)。
7.根据权利要求4所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤(1)中，将D-阿拉伯糖脱氢酶、D-阿拉伯糖酸脱水酶同时克隆到PRSF-duet-1质粒中得到重组质粒A，将2-酮酸脱羧酶、醇脱氢酶同时克隆到PET-duet-1质粒中，得到重组质粒B。
8.根据权利要求7所述的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法，其特征在于，将重组质粒A和重组质粒B同时导入宿主菌中。
9.权利要求4～8所述利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌的构建方法构建得到的利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌。
10.权利要求9所述利用D-阿拉伯糖生产D-1,2,4-丁三醇的基因工程菌在生产D-阿拉伯糖中的应用。
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