[发明专利]一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码及直缘乌头的鉴定方法

权利要求书

1.一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码为由引物对扩增得到的总长为443bp的DNA片段，所述引物对的序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示；所述DNA片段的碱基序列中，第106-112bp为碱基ACTAAGA，第201-210bp为碱基CCTATCTATA。

2.根据权利要求1所述的DNA条形码，其特征在于，所述DNA条形码的序列如SEQ IDNO.3所示。

3.一种基于大数据的直缘乌头鉴定方法，其特征在于，包括以下步骤：

(1)提取待测样本DNA；

(2)利用DNA条形码的引物对进行PCR扩增，得到443bp的扩增产物，所述引物对序列分别为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

(3)对所述扩增产物进行测序，按照下列特异性位点进行直缘乌头物种鉴别的序列特征比对：第106-112bp为碱基ACTAAGA，第201-210bp为碱基CCTATCTATA；

若扩增产物符合上述条件，则该待测样本为直缘乌头。

4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述PCR的扩增体系为20μL，组份配比如下：10μmol/L正反向引物各0.5μL，2×TaqPCRMasterMix10μL，50～100ng/L模板DNA 1.0μL，ddH₂O 8μL。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述PCR的扩增条件为：95℃预变性2min，1个循环；95℃变性30s，52℃退火1min，72℃延伸2min，35个循环；72℃延伸7min。

6.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述测序为双向测序，所述测序的引物对序列如SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示。

7.根据权利要求6所述的方法，其特征在于，所述测序的反应体系为5μL：其中ddH₂O 3μL，10μmol/L正反向引物各0.25μL，测序反应混合物0.5μL，PCR纯化产物1μL。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述测序的反应条件为：96℃预变性10s，50℃退火5s，60℃延伸4min，33个循环。