[发明专利]一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码及直缘乌头的鉴定方法

说明书

本发明公开了一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码及直缘乌头的鉴定方法，属于分子鉴定技术领域。通过广泛调查直缘乌头的野外分布区、主要栽培区、野外同域分布物种以及近缘药用物种的资料信息，然后尽可能的进行多个地方采样，构建样品的DNA条形码大数据库，比较并发现直缘乌头特有的序列信息位点，进一步获得其特有的可用于鉴定的DNA条形码。所述DNA条形码为由引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2扩增得到的总长为443bp的序列，其中第106‑112bp为碱基ACTAAGA，第201‑210bp为碱基CCTATCTATA。利用该DNA条形码将大大有利于药用植物直缘乌头的快速鉴定。

技术领域

本发明涉及分子鉴定技术领域，尤其涉及一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码，及利用该DNA条形码鉴定直缘乌头的方法。

背景技术

直缘乌头(Aconitum transsectum Diels)，又名大草乌、草乌、小黑牛，为毛莨科乌头属多年生草本植物，分布于我国云南西北部丽江玉龙山，民间常用于治疗跌打损伤、风湿骨痛等症。直缘乌头的块根是已知药用草乌中最大的，因富含草乌甲素(Bulleyaconitine A)近年来被大量栽培。草乌甲素为二萜生物碱，是目前临床疗效最好，有效剂量和中毒剂量差异最大的作用于外周神经系统的非成瘾性镇痛药物，以草乌甲素为原料的片剂、胶囊剂等剂型作为镇痛药可作为长期用药。然而，与乌头属的其他植物一样，直缘乌头的块根也有大毒。乌头属植物在我国有200余种，在云南省分布的就有70余种，依靠传统的形态分类或显微鉴定的方法在乌头属药用物种的鉴别上存在局限性。为便于规范用药，如何快速准确的鉴定直缘乌头这一问题急需解决。

DNA条形码技术(DNA Barcoding)是通过对一个或多个标准目的基因的DNA序列进行分析，从而快速、准确地进行物种鉴定的技术。近几年来，DNA条形码技术已经被证明是一个行之有效的生物鉴定手段，不仅可对传统鉴定方法作强有力的补充，而且因为其更客观、准确，突破以往对经验的过渡依赖，能帮助鉴定物种。不同的基因片段对不同物种的鉴定能力存在很大差异，根据本发明人的前期研究和已有的研究报道发现，基因片段matK，trnH-psbA和ITS对乌头属物种有一定的鉴别能力，但仍无法有效的将直缘乌头与其他常用的乌头属药用植物进行区分。本发明将在对乌头属药用植物同一物种进行多地方广泛采样的基础上，先构建不同物种的DNA条形码大数据库，然后从中获得直缘乌头的特有信息位点，实现快速鉴定。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码，及利用该DNA条形码鉴定直缘乌头的方法，实现快速鉴定，提高鉴定结果的可靠性和准确率。

本发明的技术方案如下：

本发明提供一种基于大数据的直缘乌头DNA条形码，所述DNA条形码为由引物序列SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2扩增得到的总长为443bp的序列，其中第106-112bp为碱基ACTAAGA，第201-210bp为碱基CCTATCTATA。

优选的，所述DNA条形码的序列如SEQ ID NO.3所示。

本发明还提供一种基于大数据DNA条形码的直缘乌头鉴定方法，包括以下步骤：

(1)提取待测样本DNA；

(2)利用DNA条形码引物进行PCR扩增，得到443bp的扩增产物，所述DNA条形码引物序列为SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2；

(3)对所述扩增产物进行测序，按照下列特异性位点进行直缘乌头物种鉴别的序列特征比对：第106-112bp为碱基ACTAAGA，第201-210bp为碱基CCTATCTATA；

若扩增产物符合上述条件，则该待测样本为直缘乌头。