[发明专利]一种添加鼠尾草酸的猪卵母细胞体外成熟培养液及其应用

说明书

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种添加鼠尾草酸的卵母细胞体外成熟培养液及其应用。所述体外成熟培养液，其特征在于，组分包括鼠尾草酸；所述鼠尾草酸浓度范围为1‑20μM。本发明通过在猪卵母细胞成熟培养液中添加鼠尾草酸，配合其他组分的协同作用，提高了猪卵母细胞成熟质量，对猪胚胎早期发育有良好的促进效果。结果表明，浓度适宜的鼠尾草酸可有效提高卵母细胞成熟质量，从而提升猪卵母细胞体外发育潜力。且该体外成熟培养液制备简单，操作方便，具有较大应用前景。

技术领域

本发明涉及细胞培养技术领域，具体涉及一种添加鼠尾草酸的卵母细胞体外成熟培养液及其应用。

背景技术

随着胚胎移植、冷冻精液技术、克隆转基因技术的发展，卵母细胞需求量越来越大。卵母细胞体外成熟受众多因素的调控，调控机制比较复杂，对其进行研究不论对于卵成熟机理的理论还是胚胎实际生产，都具有重要的意义。由于利用猪的超数排卵技术所获得的卵母细胞或者胚胎数量是极其有限的，并不能满足大量优质卵母细胞的需求，而且操作复杂、成本较高，所以体外成熟技术就显得尤为重要。猪卵母细胞体外成熟是指从屠宰场直接采集废弃卵巢，取出未成熟的卵母细胞后，在体外模拟体内成熟环境来达到成熟的目的。由于猪卵母细胞含有相对大量的脂肪滴，对温度比较敏感，体外操作难度相对更大。目前体外成熟培养的卵母细胞和体内生产的胚胎相比，体外成熟卵的体外胚胎发育到囊胚的比率低下。针对这些问题，各研究学者对猪卵母细胞的成熟进行了不断地研究，希望不断提高体外成熟卵母细胞的质量。因此，优化卵母细胞体外成熟培养条件对提高体外胚胎生产效率具有重要意义。

发明内容

本发明提供一种添加鼠尾草酸的卵母细胞体外成熟培养液及其应用。

本发明的第一个目的，提供一种添加鼠尾草酸的卵母细胞体外成熟培养液，其组分包括鼠尾草酸。优选地，所述鼠尾草酸浓度为1-20μM。

进一步优选地，鼠尾草酸浓度范围2-10μM，以2-5μM为最优。

本发明通过在卵母细胞体外成熟培养液中添加鼠尾草酸，提高了卵母细胞成熟质量，对胚胎发育有良好的促进效果。

优选地，组分还包括卵母细胞常规培养液，谷氨酰胺，庆大霉素，孕马血清促性腺激素，人绒毛膜促性腺激素，猪卵泡液，血清；

优选地，所述卵母细胞常规培养液体积比为70-80％，所述谷氨酰胺浓度为0.02-0.06g/L，所述庆大霉素浓度为0.1-0.2g/L，所述孕马血清促性腺激素浓度为20000-25000U/L，所述人绒毛膜促性腺激素浓度为10000-15000U/L，所述卵泡液浓度体积比为8-12％，所述血清浓度体积比为8-12％。

关于卵母细胞常规培养液，优选地，所述卵母细胞常规培养液为Medium199，DMEM，TCM中的一种。进一步优选为Medium199。

关于血清，优选地，所述血清为小牛血清，胎牛血清或新生牛血清中的一种。

本发明提供一种较为优选的卵母细胞体外成熟培养液，配方如下：Medium199体积比为75-80％，谷氨酰胺为0.02-0.06g/L，庆大霉素浓度为0.12-0.16g/L，孕马血清促性腺激素浓度为20000-25000U/L，人绒毛膜促性腺激素浓度为10000-15000U/L，猪卵泡液浓度体积比为8-12％，血清浓度体积比为8-12％，鼠尾草酸浓度为2-5μM。

本发明提供的体外成熟培养液可提高卵母细胞抗氧化能力，活性成分的协同作用可有效提高卵母细胞成熟质量，从而提升卵母细胞体外发育潜力，在应用本发明所述的体外成熟培养液培养卵母细胞时，能够有效减少外界环境带来的应激损伤，促进卵母细胞的细胞质成熟，提高了体外成熟的卵母细胞孤雌激活和受精后的胚胎发育能力。且该体外成熟培养液制备简单，操作方便，具有较大应用前景。

本发明还提供上述体外成熟培养液在培养动物的卵母细胞的应用。