[发明专利]一种黄花白芨的鉴别方法

说明书

本发明公开了一种黄花白芨的鉴别方法，属于中药材鉴别技术领域，该方法包括以下步骤：挑选一批不同种类的黄花白芨和紫花白芨，采用CTAB方法分别抽提白芨个体基因组DNA，然后设计引物对白芨核糖体大亚基基因的D1‑D3区DNA序列进行扩增、克隆、测序和序列比对，确定待测SNP位点；进而针对待测SNP位点设计特异性的PCR扩增引物进行PCR扩增，验证SNP位点，得出标准数据；最后采用PCR扩增引物对待测样本的DNA进行扩增，并根据扩增产物在PCR扩增电泳图中目的条带的有无确定待测样本的SNP位点基因型，与标准数据相比较，从而判定待测样品是黄花白芨还是紫花白芨。

技术领域

本发明涉及中药材真假鉴别技术领域，具体涉及一种黄花白芨的鉴别方法。

背景技术

白芨是兰科，白芨属的一种。据《中国植物志》记载，全世界约有6种白芨，分布于亚洲的缅甸北部经我国至日本。我国产4种，分别为白芨、华北白芨、小白芨和黄花白芨，我国目前栽培的白芨品种有紫花白芨、黄花白芨和少量的小白芨。

白芨以干燥块茎药用，具有收敛止血、清热利湿、消肿生肌之功效，临床上广泛用于治疗咳血、吐血、外伤出血、疮疡肿毒、肺结核咳血、溃疡病出血等病症，具有很大的商品开发潜力。近几年，随着对白芨药物成分的进一步分析，发现了它富含很多特殊的药用成分，包括白芨联菲、白芨联菲醇、白芨双菲醚、白芨二氢菲并吡喃酚、白芨菲螺醇，这些成分很难被其他物种替代，并且有很重要的利用价值。因此，白芨野生资源已远远不能满足市场需求，价格逐步攀升。

尽管白芨属的几个种类均可作为中药材，但2015版《中国药典》中规定，中药材白芨为兰科植物白芨即紫花白芨的干燥块茎，而从干燥后的块茎很难区分是紫花白芨还是黄花白芨，加上黄花白芨块茎细胞组织相对疏松，折干率相对低。因此，开发能够鉴别黄花白芨与紫花白芨的鉴别方法对保障药材的质量至关重要，但目前尚未出现相关文献报道。

发明内容

为了克服现有技术的不足，本发明提供了一种黄花白芨的鉴别方法。

本发明是通过以下技术方案实现的。

一种黄花白芨的鉴别方法，包括以下步骤：

a、挑选种植时间相同的黄花白芨和紫花白芨各3株，采用CTAB方法分别抽提个体基因组DNA；

b、设计引物分别对3株紫花白芨DNA和3株黄花白芨DNA的核糖体大亚基基因的D1-D3区DNA序列进行扩增、克隆、测序和序列比对，当3株紫花白芨和3株黄花白芨都出现SNP位点时，确定该待测SNP位点；

c、针对SNP位点设计特异性的PCR扩增引物，将PCR扩增引物中的正向引物或反向引物的3'末端对应待测SNP进行扩增，验证该SNP位点，得出SNP位点标准基因数据；

d、采用PCR扩增引物对待测样本的DNA进行扩增，并根据扩增产物在PCR扩增电泳图中目的条带的有无确定待测样本SNP位点基因型，将此基因与SNP位点标准基因数据相比较，从而判定待测样品是黄花白芨还是紫花白芨。

优选的，步骤(b)中，所述引物为DUAN5：5'-TAGTAACGGCGA GCGAAC-3'；DUNA6：5'-GGCATAGTTCACCATCTTTC-3'。

优选的，步骤(b)中，所述扩增产物大小为760bp。

优选的，步骤(b)中，所述SNP位点位于白芨核糖体大亚基基因的D1-D3区DNA序列扩增产物的637bp处和642bp处，其中黄花白芨在这2个位点碱基分别为C、G，紫花白芨为T、A。

优选的，步骤(c)中，所述SNP位点验证方法为设计如下特异引物：DUAN5：5'-TAGTAACGGCGAGCGAAC-3'，JDHH：5'-TTATCAGCTTCCTTGCGCCG-3'；扩增引物中反向引物的3'末端对应第一个待测SNP，扩增产物大小为650bp。