[发明专利]一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法

权利要求书

1.一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤（1），选取重量和吸阻一致的烟支作为待表征样品，平衡后使用全自动转盘式吸烟机抽吸10-20支卷烟，用剑桥滤片捕集烟气总粒相物；之后剑桥滤片用DMSO浸泡，超声波提取TPM，最后用DMSO定容至10g TPM/mL DMSO，得到TPM溶液，-80℃低温保存，备用；

步骤（2），配制含1mg/mL唾液淀粉酶的人工唾液，离心，取上清，得到唾液上清；

步骤（3），按照体积比为1：9的比例，将步骤（1）得到的TPM溶液加入步骤（2）得到的唾液上清中，于37℃下孵育10min后取出，离心，取上清，得到TPM上清；

步骤（4），分别向步骤（2）得到的唾液上清、步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液，混匀，室温放置10min，得到染色唾液上清和染色TPM上清；

其中，向步骤（2）得到的唾液上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液的体积为唾液上清体积的19倍；向步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液的体积为TPM上清体积的19倍；

步骤（5），用分光光度计分别测定步骤（4）得到的染色唾液上清和染色TPM上清在595 nm处的吸光值，根据蛋白标准曲线，计算染色唾液上清和染色TPM上清中蛋白质含量；

步骤（6），根据步骤（5）得到的染色唾液上清和染色TPM上清中蛋白质含量，计算唾液淀粉酶沉淀比例；唾液淀粉酶沉淀比例=（染色唾液上清蛋白质含量-染色TPM上清中蛋白质含量）÷染色唾液上清蛋白质含量；该沉淀比例即为待表征样品的收敛感。

2.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（1）所述的平衡条件为：温度22±1℃，湿度60±2%，时间48h。

3.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（1）所述的抽吸的抽吸频率为1口/min，抽吸持续时间为2s，抽吸容量为35mL±0.15mL/口。

4.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（1）所述的超声波提取时间为20min。

5.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（2）所述的离心速度为10000-12000rpm/min，时间为10min。

6.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（3）所述的离心速度为10000-12000rpm/min，时间为10min。

7.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，在细胞培养板中向步骤（2）得到的唾液上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液。

8.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，在细胞培养板中向步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液。

9.根据权利要求7或8所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，所述的细胞培养板为96孔板。

10.根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，步骤（4）中，唾液上清和TPM上清均设三个平行样进行染色，蛋白质含量计算时，为三个平行样的均值。