[发明专利]一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法

说明书

技术领域

本发明属于生物应用技术领域，具体涉及一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法。

背景技术

卷烟的感官感受主要取决于烟气中种类繁多的化学成分与口腔之间的相互作用。传统卷烟感官浅析与评价依赖于人工评吸，但人工评吸受到评吸人员自身因素及外部环境的影响，这给卷烟评价结果带来了不确定的因素。新型感官浅析技术例如基于多传感列阵的电子舌技术，可根据电子舌输出的传感器响应值计算出样品味觉的强度，但对于余味、收敛感及生津感等三项指标中，并未得到较为理想的拟合效果。因此如何通过合适的生物化学方法来对卷烟烟气收敛感进行表征，对卷烟配方的优化调整起着重要作用。

发明内容

本发明的目的是为了解决现有技术的不足，提供一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，该方法采用生物化学检测方法，其结果为卷烟烟气的感官评价提供参考依据。

为实现上述目的，本发明采用的技术方案如下：

一种表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，包括如下步骤：

步骤（1），选取重量和吸阻一致的烟支作为待表征样品，平衡后使用全自动转盘式吸烟机抽吸10-20支卷烟，用剑桥滤片捕集烟气总粒相物；之后剑桥滤片用DMSO浸泡，超声波提取TPM，最后用DMSO定容至10g TPM/mL DMSO，得到TPM溶液，-80℃低温保存，备用；

步骤（2），配制含1mg/mL唾液淀粉酶的人工唾液，离心，取上清，得到唾液上清；

步骤（3），按照体积比为1：9的比例，将步骤（1）得到的TPM溶液加入步骤（2）得到的唾液上清中，于37℃下孵育10min后取出，离心，取上清，得到TPM上清；

步骤（4），分别向步骤（2）得到的唾液上清、步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液，混匀，室温放置10min，得到染色唾液上清和染色TPM上清；

其中，向步骤（2）得到的唾液上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液的体积为唾液上清体积的19倍；向步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液的体积为TPM上清体积的19倍；

步骤（5），用分光光度计分别测定步骤（4）得到的染色唾液上清和染色TPM上清在595 nm处的吸光值，根据蛋白标准曲线，计算染色唾液上清和染色TPM上清中蛋白质含量；

步骤（6），根据步骤（5）得到的染色唾液上清和染色TPM上清中蛋白质含量，计算唾液淀粉酶沉淀比例；唾液淀粉酶沉淀比例=（染色唾液上清蛋白质含量-染色TPM上清中蛋白质含量）÷染色唾液上清蛋白质含量；该沉淀比例即为待表征样品的收敛感。

进一步，优选的是，步骤（1）所述的平衡条件为：温度22±1℃，湿度60±2%，时间48h。

进一步，优选的是，步骤（1）所述的抽吸的抽吸频率为1口/min，抽吸持续时间为2s，抽吸容量为35mL±0.15mL/口。

进一步，优选的是，步骤（1）所述的超声波提取时间为20min。

进一步，优选的是，步骤（2）所述的离心速度为10000-12000rpm/min，时间为10min。

进一步，优选的是，步骤（3）所述的离心速度为10000-12000rpm/min，时间为10min。

进一步，优选的是，在细胞培养板中向步骤（2）得到的唾液上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液。

8、根据权利要求1所述的表征卷烟烟气对口腔收敛感影响的体外方法，其特征在于，在细胞培养板中向步骤（3）得到的TPM上清中加入考马斯亮蓝G-250溶液。

进一步，优选的是，所述的细胞培养板为96孔板。

进一步，优选的是，步骤（4）中，唾液上清和TPM上清均设三个平行样进行染色，蛋白质含量计算时，为三个平行样的均值。

TPM为卷烟的主流烟气总粒相物。

本发明中所述的蛋白标准曲线按照考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的常规方法进行制作即可，无特殊限制。

本发明与现有技术相比，其有益效果为：

本发明的方法操作简单，利用唾液蛋白沉淀会产生收敛感的原理，采用唾液淀粉酶模拟唾液中的蛋白环境，用其沉淀比例来定量表征收敛感的大小。且采用体外抽吸捕集烟气总粒相物再与唾液淀粉酶进行反应，通过这一浓缩过程放大烟气对唾液淀粉酶的影响效果，从而比较出不同卷烟烟气的细微差异，可用于卷烟烟气对口腔收敛感的定量表征，为卷烟烟气的感官评价提供参考。

附图说明