[发明专利]一种厌氧氨氧化菌的真空冷冻干燥保藏及复壮的方法

权利要求书

1.一种厌氧氨氧化菌的真空冷冻干燥保藏方法，其特征在于，步骤如下：

(1)对待保藏的厌氧氨氧化混培物，在6000rpm条件下离心10min后，弃置上清液；再加入0.2M磷酸盐缓冲溶液、混匀，离心去除上清液，重复多次，得到厌氧氨氧化菌沉淀物；

(2)将步骤(1)得到的厌氧氨氧化菌沉淀物置于经灭菌处理后的培养皿中，再向培养皿中加入二甲基亚砜，混匀，混合过程进行氮气吹扫；其中，二甲基亚砜的添加量为混合物总质量的3％；

(3)将步骤(2)得到的混合物置于-20℃条件下预冻；

(4)将上述装有待保藏菌体的表面皿置于真空冷冻干燥机中，在温度-92℃、真空度5Pa条件下，冷冻干燥，得到干菌粉；

(5)将步骤(4)获得的干菌粉转移真空袋后，经真空密封后放入4℃避光保藏。

2.一种优化的保藏菌种复壮方法，其特征在于，步骤如下：

(1)保藏期结束后，向干菌粉加入0.2MPBS，混匀，离心去除上清液，重复多次，得到厌氧氨氧化沉淀物；向厌氧氨氧化沉淀物中加入基质溶液，曝氮气脱氧后放入4℃冰箱中使细胞补水24h；

(2)补水后弃置上清液，再次离心清洗，将所得厌氧氨氧化沉淀物转移至复壮反应器，对复壮反应器曝氮气后开始复壮过程；

(3)在复壮过程的菌体自溶期结束后；向复壮反应器中加入复壮反应器的容积分数1％的厌氧氨氧化污泥混培物以加快复壮过程；

以上步骤的混合过程在避光和无氧条件下进行。