[发明专利]用于核酸合成和扩增的组合物、方法和试剂盒

权利要求书

1.鱼胶在制备具有增加的对PCR抑制剂的耐受性的用于RT-PCR的组合物中的用途，所述组合物包含：

至少一种热稳定性DNA聚合酶，

至少一种热稳定性逆转录酶(RT)，和

鱼胶，其中相对于不含任何PCR抑制剂阻断剂的组合物，所述鱼胶增强对一种或多种PCR抑制剂的耐受性并且降低Ct；

其中所述PCR抑制剂选自腐殖酸和肝素；并且

其中与不含所述鱼胶的组合物相比，所述耐受性增加。

2.权利要求1的用途，其中所述热稳定性逆转录酶为M-MLV逆转录酶或其突变体、变体或衍生物。

3.权利要求2的用途，其中所述MMLV RT包含选自Y64、R116、D124、H126、Y133、K152、Q190、T197、H204、V223、M289、T306和F309的一个或多个突变。

4.权利要求1的用途，其中所述热稳定性DNA聚合酶为Taq DNA聚合酶或其突变体、变体或衍生物。

5.权利要求1的用途，其中所述组合物在-20℃为液体或凝胶。

6.权利要求1的用途，其中所述组合物在-20℃不为固体。

7.权利要求1的用途，其中所述组合物在-20℃不冻结。

8.权利要求1的用途，其中当贮存于-20℃时，所述组合物在使用之前不需要解冻。

9.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含一种或多种核苷酸(dNTP)。

10.权利要求9的用途，其中所述核苷酸选自dTTP、dATP、dCTP、dGTP或dUTP。

11.权利要求9的用途，其中所述核苷酸的每一种的浓度为约0.5mM至5mM。

12.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含甘油。

13.权利要求12的用途，其中所述甘油的浓度为5％-50％。

14.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含RNA酶抑制蛋白(RIP)。

15.权利要求14的用途，其中所述RIP的浓度为0.1U/μL至1.0U/μL。

16.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含去垢剂。

17.权利要求16的用途，其中所述去垢剂为NP-40或TWEEN 20。

18.权利要求16的用途，其中所述去垢剂的浓度为0.005％至0.05％。

19.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含被动参考对照。

20.权利要求19的用途，其中所述被动参考对照为ROX染料。

21.权利要求1的用途，其中所述组合物用于核酸合成、核酸扩增或RT-PCR法。

22.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含浓度为约500ng/μl至5000ng/μl的BSA，并且其中所述鱼胶的浓度是约0.4％至4％。

23.权利要求1的用途，其中所述组合物还包含浓度为约800ng/μl的BSA，并且其中所述鱼胶的浓度是约0.5％。