[发明专利]一种鉴别石斛属植物的方法在审
| 申请号： | 201711002452.3 | 申请日： | 2017-10-24 |
| 公开（公告）号： | CN107604089A | 公开（公告）日： | 2018-01-19 |
| 发明（设计）人： | 陈军文;张敬丽;刘涛;蔡金龙;赵艳;谢世清;张广辉;范伟;杨生超 | 申请（专利权）人： | 云南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895 |
| 代理公司： | 昆明正原专利商标代理有限公司53100 | 代理人： | 陈左,于洪 |
| 地址： | 650201 云南*** | 国省代码： | 云南;53 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 鉴别 石斛 植物 方法 | ||
1.一种鉴别石斛属植物的方法，其特征在于，包括如下步骤：
（1）对待鉴定样本进行总DNA提取；
（2）以步骤（1）提取的总DNA为模板，用SEQ ID NO.1和SEQ ID NO.2所示的引物进行PCR扩增，获得扩增产物；
（3）使用CodonCode Aligner对扩增产物测序峰图进行校对拼接，去除低质量序列及引物区，用ClustalXv2.0进行多重序列比对后，去除俩端的多余序列，处理后的序列用于下一步的序列分析；使用Mega6.0软件计算序列的K-2-P距离，分析比较序列的种内种间遗传距离，并构建系统进化树，从而通过对不同种石斛的ITS序列的聚类来区分石斛物种。
2.根据权利要求1所述的鉴别石斛属植物的方法，其特征在于所述PCR 扩增的体系为：ddH2O 8.5μL，2×Taq PCR Master Mix 12.5μL，SEQ ID NO.1所示引物 2.5μmol/L 1μL，SEQ ID NO.2所示引物 2.5μmol/L 1μL，模板DNA 50ng/μL 2.0μL，总计25μL。
3.根据权利要求1所述的鉴别石斛属植物的方法，其特征在于所述PCR扩增的程序为：94℃预变性5min；然后进入循环，每个循环94℃变性50sec，54℃退火30 sec，72℃延伸60 sec，共30个热循环，最后延伸72℃延伸7min；4℃冷却后取出。
4.根据权利要求1所述的鉴别石斛属植物的方法，其特征在于，待鉴定样本叶片按照CTAB法提取总DNA，使用RNA酶A纯化总DNA样本后，用紫外分光光度计测定260nm和280nm下的光密度值，当测得DNA纯度达到OD260/OD280在1.6-1.8之间，则进行步骤（2）PCR反应，反之，则需要重新提取DNA。
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