[发明专利]一种提取利福霉素B的方法

说明书

本发明公开了一种利福霉素B提取的工艺，具体步骤包括1、发酵液或板框滤液通过陶瓷微滤膜过滤澄清；2、将微滤膜清液通过超滤膜过滤除杂；3、将超滤膜清液通过纳滤膜浓缩；4、将纳滤膜浓液调节pH到2.0‑2.5，加乙酸丁酯萃取；5、将得到的乙酸丁酯相调节pH至7.5‑8.5进行两级错流反萃取；6、再将得到的水相调节pH至2.0‑2.5，加乙酸乙酯进行二次萃取；7、将乙酸乙酯相进行冷冻，析出晶体；8、离心，得到利福霉素B晶体；9、将离心母液减压蒸馏结晶，得到利福霉素B粗产品，返回乙酸乙酯萃取工段。本发明优点在于：去除大量杂质，提高了产品纯度、收率及单位效价；减少了生产工序段，降低了生产成本；操作简单，高效节能，最终得到的利福霉素B纯度大于98％。

技术领域

本发明属于化学领域，具体涉及一种提取利福霉素B的方法。

背景技术

利福霉素B(rifamycins)是1959年Sensi等从地中海链霉菌(Streptomycesmediterranoi)的代谢产物中分离提取的复合物，继而又分离出A，B，C，D，E等。利福霉素B类抗生素具有广谱抗菌作用，对结核杆菌、麻风杆菌、链球菌、肺炎球菌等革兰氏阳性细菌，特别是耐药性金黄色葡萄球菌的作用都很强。对某些革兰氏阴性菌也有效。

利福霉素B类药物的母核结构为一个有27个碳原子的大环内酰胺，环中含有一个萘核。萘环上，由一脂肪链分别与C-2和C-12的C原子相连接，构成“安莎桥”结构，故也被归入安莎霉素类抗生素。C-15位羰基以酰胺键与萘核相连，使脂肪链与萘核呈71°角，这保证了这个结构的几何稳定性。安莎桥中，离萘核最近的是C-26位，该位点上连接的甲基C-34离萘核只有利福霉素B的母核包含8个手性中心：即20S，21S，22R，23R，24R，25S，26R和27S。

利福霉素B的作用机制主要有两方面：

(1)通过与细菌的DNA依赖性RNA聚合酶(DDRP)的β-亚单位结合，抑制细菌RNA合成的起始阶段，阻碍mRNA的合成。从DNA合成RNA是细菌遗传转录的第一阶段，RNA聚合酶通过键合在一段DNA束的特定序列上催化转录过程。利福霉素B可竞争酶的结合部位：其萘核可以与聚合酶的芳香酸，特别是酪氨酸残基之间通过类似π-π键作用而形成复合物；其C-1和C-8位的羟基键合在细菌β-亚单位中氨基酸的1.4～1.9nm的空腔中；同时，其脂肪链插入酶中，使C-21和C-23位的羟基片段参与竞争RNA链上酶的结合部位，使DNA、RNA和全酶三者形成不稳定的复合物，最终致细菌死亡。

(2)另一方面，因为所有利福霉素B衍生物都具有相同的母核，所以大多数该类化合物都能抑制DNA转录RNA，其表现出的抗菌活性差异主要是因为各衍生物透过细胞壁的能力不同所致。例如，利福霉素B对分离的DNA聚合酶有良好的抑制作用，但因为其不能透过细胞壁，所以实际上抗菌活性较弱。不能透过细胞壁主要是因为其连接在萘核C-4位的羧基，而C-4位连接酰胺、肼或酯基的衍生物都具有较好的抗菌活性。

1962年，利福霉素B经化学转化为利福霉素BSV，并被最先用于临床。由于其口服吸收不佳，故从3-甲酰利福霉素BSV的多个衍生物中又筛选得到甲哌利福霉素B，即利福平。该品可口服给药，而且疗效好，但易使菌株产生耐药性，有效时间短，对艾滋病并发症中的鸟复合分枝杆菌(MAC)感染活性较低，毒性较大。

利福霉素B是利福霉素B发酵产品中的主要产物，也是多种利福霉素B类衍生物的重要合成原料。由于菌种潜力的不同，目前国内利福霉素BSV的发酵水平约为7000ug/ml，发酵生产利福霉素B的效价可达到20000ug/ml。通过发酵法生产利福霉素B，再经化学反应制备利福霉素B类半合成抗生素，较之从利福霉素BSV出发合成利福霉素B类药物，具有潜在的竞争优势。

现阶段传统利福霉素B的提取方法主要是通过在发酵液添加硫酸锌来絮凝、沉降蛋白质，然后经过板框压滤，一次萃取、三级错流反萃取、二次萃取、碱洗、减压蒸馏结晶、烘干包装。该方法有以下缺点：