[发明专利]一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法

权利要求书

1.一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、将平卧菊三七叶按长度为30mm～40mm进行切分，然后置于恒温干燥箱中50℃干燥34min，干燥后平卧菊三七叶含水量保持在初始重量60％，再进行粉碎，过60目筛，得到平卧菊三七叶粉末，装袋备用；

步骤2、称取平卧菊三七叶粉末100g加入4000ml体积百分比浓度为70％甲醇水溶液中，将其放入超声波清洗器中，提取温度为50℃，提取时间为30min，提取功率为400W，提取次数为3次，过滤，得到提取液，提取液即为绿原酸粗提取物，绿原酸提取率为3.58％；

步骤3、将绿原酸对照品用流动相稀释制备对照品溶液，对步骤2得到的绿原酸粗提取物取样，样品用流动相稀释后，再通过孔径为0.50μm的滤膜过滤，滤液即为供试品溶液；将对照品溶液、供试品溶液分别进行HPLC分析，HPLC色谱条件：ODS C₁₈色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈-0.5％乙酸水溶液，乙腈与乙酸水溶液体积比为10：90；检测波长327nm；流速0.5mL/min；进样量为20μL；柱温为30℃；根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量；

步骤4、步骤2得到的绿原酸粗提取物，经MCI树脂柱分离，获得洗脱液，质量浓度为4.2mg/mL的洗脱液用中高压制备液相色谱分离纯化，制备色谱的分离条件：ODS C₁₈色谱柱，920mm×70mm；流动相为甲醇和水，甲醇和水的体积比40：60，梯度洗脱，浓度分别为10wt％、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％甲醇，流速为10mL/min，检测波长327nm，进样量为10mL；收集含有绿原酸的洗脱液，再通过温度为50℃、真空度为0.05Mpa的减压蒸馏、温度为60℃、真空度为95.0Kpa、烘干时间为8h的真空干燥得到白色粉末状绿原酸，绿原酸单体纯度为95.85％，回收率为80.67％。

2.一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、将平卧菊三七叶按长度为30mm～40mm进行切分，然后置于恒温干燥箱中40℃干燥40min，干燥后平卧菊三七叶含水量保持在初始重量55％，再进行粉碎，过80目筛，得到平卧菊三七叶粉末，装袋备用；

步骤2、称取平卧菊三七叶粉末100g加入2000ml体积百分比浓度为65％甲醇水溶液中，将其放入超声波清洗器中，提取温度为60℃，提取时间为40min，提取功率为450W，提取次数为3次，过滤，得到提取液，提取液即为绿原酸粗提取物，绿原酸提取率为3.35％；

步骤3、将绿原酸对照品用流动相稀释制备对照品溶液，对步骤2得到的绿原酸粗提取物取样，样品用流动相稀释后，再通过孔径为0.45μm的滤膜过滤，滤液即为供试品溶液；将对照品溶液、供试品溶液分别进行HPLC分析，HPLC色谱条件：ODS C₁₈色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈-0.5％乙酸水溶液，乙腈与乙酸水溶液体积比为10：90；检测波长327nm；流速0.5mL/min；进样量为20μL；柱温为30℃；根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量；

步骤4、步骤2得到的绿原酸粗提取物，经MCI树脂柱分离，获得洗脱液，质量浓度为3.5mg/mL的洗脱液用中高压制备液相色谱分离纯化，制备色谱的分离条件：ODS C₁₈色谱柱，920mm×70mm；流动相为甲醇和水，甲醇和水的体积比40：60，梯度洗脱，浓度分别为10wt％、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％甲醇，流速为12mL/min，检测波长327nm，进样量为20mL；收集含有绿原酸的洗脱液，再通过温度为40℃、真空度为0.08Mpa减压蒸馏、温度为50℃、真空度为99.5Kpa、烘干时间为12h的真空干燥得到白色粉末状绿原酸，绿原酸单体纯度为93.24％，回收率为75.22％。

3.一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其特征是：其包括以下步骤：

步骤1、将平卧菊三七叶按长度为30mm～40mm进行切分，然后置于恒温干燥箱中60℃干燥30min，干燥后平卧菊三七叶含水量保持在初始重量70％，再进行粉碎，过40目筛，得到平卧菊三七叶粉末，装袋备用；

步骤2、称取平卧菊三七叶粉末100g加入4500ml体积百分比浓度为70％甲醇水溶液中，将其放入超声波清洗器中，提取温度为50℃，提取时间为30min，提取功率为400W，提取次数为5次，过滤，得到提取液，提取液即为绿原酸粗提取物，绿原酸提取率为3.37％；

步骤3、将绿原酸对照品用流动相稀释制备对照品溶液，对步骤2得到的绿原酸粗提取物取样，样品用流动相稀释后，再通过孔径为0.48μm的滤膜过滤，滤液即为供试品溶液；将对照品溶液、供试品溶液分别进行HPLC分析，HPLC色谱条件：ODS C₁₈色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈-0.5％乙酸水溶液，乙腈与乙酸水溶液体积比为10：90；检测波长327nm；流速1.0mL/min；进样量为20μL；柱温为30℃；根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量；

步骤4、步骤2得到的绿原酸粗提取物，经MCI树脂柱分离，获得洗脱液，质量浓度为4.8mg/mL的洗脱液用中高压制备液相色谱分离纯化，制备色谱的分离条件：ODS C18色谱柱，920mm×70mm；流动相为甲醇和水，甲醇和水的体积比40：60，梯度洗脱，浓度分别为10wt％、20wt％、30wt％、40wt％、50wt％甲醇，流速为10mL/min，检测波长327nm，进样量为10mL；收集含有绿原酸的洗脱液，再通过温度为60℃、真空度为0.06Mpa的减压蒸馏、温度为70℃、真空度为99.5Kpa、烘干时间为12h的真空干燥得到白色粉末状绿原酸，绿原酸单体纯度为93.95％，回收率为75.24％。