[发明专利]一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法

说明书

本发明公开一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其以平卧菊三七的叶为原料，将平卧菊三七叶切分、烘干、粉碎，过筛，得到平卧菊三七叶粉末，平卧菊三七叶粉末采用微波辅助提取得到绿原酸粗提物，采用高效液相色谱法对绿原酸粗提物中的绿原酸含量进行测定，再通过中高压制备液相色谱法分离纯化绿原酸粗提物，能够分离得到纯度高、回收率高的绿原酸的单体。本发明分离效率高，处理量大，生产周期短以及分析方法重复性好，为平卧菊三七中高纯度绿原酸的工业化生产提供了有效的技术支持。

技术领域

本发明属于绿原酸制备技术领域，尤其是涉及一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法。

背景技术

平卧菊三七(Gynura procumbens (Lour.) Merr.)为菊科三七属，又名蛇接骨、神仙草，多年生草本药食同源植物，生于林间溪旁坡地砂质土上，攀援于灌木或乔木上，在我国南方省区有广泛分布。2012年5月平卧菊三七被国家卫生部批准为新资源食品。平卧菊三七具有广泛的药理作用，据《中国中草药汇编》下册记载：其疗效为味甘淡，性平，通经活络，消炎止咳，散瘀消肿，活血生肌。主要用于治疗跌打损伤、风湿关节痛和痛风。在我国周边的东南亚民族地区，它还用于降糖降脂、抗肝癌、解脏毒和保护肠道。平卧菊三七主要活性成分有绿原酸、咖啡酸、黄酮类、生物碱、萜烯类、香豆素类、挥发油等。

绿原酸是由咖啡酸与奎尼酸组成的缩酚酸，异名咖啡鞣酸，化学名3-O-咖啡酰奎尼酸，是植物在有氧呼吸过程中由磷酸戊糖途径(HMS)的中间产物合成的一种苯丙素类物质，其包括绿原酸、隐绿原酸、新绿原酸、莱蓟素等十多种同分异构体，具有抗菌、抗病毒、保肝利胆、抗肿瘤、降血压、降血脂、降糖、清除自由基等药理作用，是保健品、食品、药品及化妆品的重要原料，因此从植物中提取分离绿原酸具有重要的意义。

目前，提取纯化绿原酸的传统方法主要有水石灰乳法、水提醇沉法、乙酸乙酯提取法、稀酸提取、单相水提取法等。这些方法单一使用，绿原酸总收率为2.5%左右，纯度在40%以下，很难达到90%以上的纯度。目前，绿原酸的生产主要存在以下问题：能够提取高纯度绿原酸的方法不适用于工业化大规模生产，适于工业化大规模生产的方法得到的绿原酸的纯度又较低，不能满足高纯度绿原酸的市场需求。

发明内容

为解决上述问题，本发明的目的是提供一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其分离效率高，处理量大，产品安全性好，生产周期短，制备得到纯度达90%以上的绿原酸单体。

为实现上述发明目的，本发明采用如下技术方案：

一种从平卧菊三七中制备高纯度绿原酸的方法，其包括以下步骤：

步骤1、预处理：以平卧菊三七的叶为原料，将平卧菊三七叶按长度为30mm～40mm进行切分，然后置于恒温干燥箱中40～60℃干燥30～40min，干燥后平卧菊三七叶含水量保持在初始重量55%～70%，再进行粉碎，过40～80目筛，得到平卧菊三七叶粉末；

步骤2、粗提取：将步骤1得到的平卧菊三七叶粉末加入65～75%甲醇水溶液中，采用微波辅助提取，平卧菊三七叶粉末与甲醇水溶液的料液比1：20～50g/ml，提取温度50～80℃，提取时间为30～70min，提取功率为400～600W，过滤，得到提取液，提取液即为绿原酸粗提取物，绿原酸提取率为2.50～3.58 %；

步骤3、检测：将绿原酸对照品用流动相稀释制备对照品溶液，对步骤2得到的绿原酸粗提取物取样，样品用流动相稀释后，再通过孔径为0.45μm～0.60μm的滤膜过滤，滤液即为供试品溶液；将对照品溶液、供试品溶液分别进行HPLC分析，HPLC色谱条件：ODS C₁₈色谱柱，4.6mm×250mm，5μm；流动相为乙腈-0.5%乙酸水溶液，乙腈与乙酸水溶液体积比为10：90；检测波长327nm；流速0.5～1.0mL/min；进样量为20μL；柱温为30℃；根据液相色谱结果，以样品峰面积与对照品峰面积比较来测定绿原酸含量；