[发明专利]用于脑中风诊断或预后评价的体外检测设备

说明书

本发明提供一种用于发光ELISA的体液样品稳定化用水溶液以及使用了该水溶液的用于脑中风诊断或预后评价的体外检测设备，所述体液样品中含有神经损伤标志性蛋白成分，在该体液样品稳定化用水溶液中，溶质包括人血清、动物血清白蛋白、无机碱金属盐、Tris碱、蛋白变性剂以及非离子型表面活性剂，该水溶液的pH值为6.7～7.6。在使用ELISA法从体液样品(例如，外周血液)中检测神经细胞损伤标志物蛋白成分NF‑H时，本发明的体外检测设备的准确性和可重复性极高，可以将体液中pg级别的NF‑H稳定而准确地检测出来，从而可以对脑中风患者的患病程度、治疗效果、预后等进行诊断。

技术领域

本发明涉及生物医学检测领域，具体地说，涉及一种针对脑卒中(脑中风)患者的体液样品稳定化用水溶液、体外检测试剂盒、以及检测系统。

背景技术

脑卒中俗称中风，由脑血管阻塞或破裂导致的脑损伤引起，危害十分严重。流行病学研究发现，当今我国中风的致残率排名第一，病死率排名第二，仅次于癌症。中风令人口眼歪斜、四肢麻木、瘫痪在床，让人失去生活尊严。目前，我国每年新增中风病例超过370万，存活的脑卒中患者近2000万人，且患者数量处于急速上升期。高血压、糖尿病、心脏病都是脑中风的危险因素，中老年人是中风高危人群。因此，需要建立快速而准确的诊断脑卒中的方法。

当今脑中风的诊断方法以影像学为主，精确度低、费用高昂，给社会卫生事业带来重大负担。加之中风患者病情变化迅速、个体差异明显，给诊断与治疗带来巨大困难。

除影像学诊断外，在诊断脑中风的方法中，还有一种利用ELISA 检测脑脊液中神经丝蛋白(neurofilament protein，NFP)含量的方法。神经丝蛋白(NFP)是中枢神经系统含量最高的蛋白之一，是构建神经丝-神经细胞相互通信联络的通道的主要成分。神经丝蛋白由三种特定的蛋白亚基(NF-L，NF-M，NF-H)组装而成。急性缺血性脑卒中直接造成大量的神经细胞死亡，而死亡的神经细胞则分解并释放出大量的结构蛋白，其中包括NF-H。因血脑屏障的原因，NF-H大都滞留在脑脊液。要检测脑脊液中的NF-H，通常采用脊髓穿刺的方法。但是，该方法给患者再次造成严重身心痛苦，给社会和家庭带来巨大医疗负担。

作为检测脑脊液中NF-H的一种方法，较为普遍的是酶联免疫吸附检测(ELISA)法，其基本原理是利用抗原、抗体的特异性反应，用已知抗原或抗体检测未知抗原或抗体。由于ELISA试验方法具有敏感、特异、经济、简便、安全等特点，目前在疾病的诊断和疗效观察以及预防医学等方面应用尤为广泛。

作为一种测定微量抗原、抗体的经典方法，ELISA法广泛应用于临床检验诊断，其技术成熟，用途广泛，分析灵敏度高、分析特异性好，操作简单。基本操作过程为：第一步，将抗原(或抗体)包被于固相载体(如聚苯乙烯塑料酶标板)上，放4℃冰箱过夜。第二步，用缓冲液洗包被板三次，加待测标本后放37℃温箱(或室温)反应 1～2.5小时。第三步，用缓冲液洗板三次，加酶标抗体后置37℃温箱 (或室温)反应1～2.5小时。第四步，用缓冲液洗板三次，加底物液显色，硫酸中止反应，上机判断结果。

作为ELISA发展的最新技术，发光ELISA将发光基团耦联到探测抗体，直接测量其所发光量来对抗原进行定量，既减少了酶/底物反应带来的附加干扰，又在极大程度上提高了探测灵敏度。

无论是通过影像学诊断还是ELISA脑脊液检测，目前，脑中风诊断的主要难点有：早期无症状或轻度症状，难以检测；实时诊断难以区分出血性中风或缺血性中风；长期治疗无法判断受损细胞类型和 /或治疗效果，造成中风诊断水平普遍低下。因此，早期诊断、快速诊断、精确诊断，特别是无需脊髓穿刺获取脑脊液就能完成这样的诊断，对于降低脑中风的致残率和致死率具有特别重要的作用。

发明内容