[发明专利]一种用于PCR快速检测猪圆环病毒3型的试剂盒和方法

权利要求书

1.一组用于PCR快速检测猪圆环病毒3型的引物，其特征在于，其包括上游引物和下游引物，所述上游引物的序列如SEQ ID No.1所示，所述下游引物的序列如SEQ ID No.2所示。

2.含有权利要求1所述引物的试剂盒。

3.如权利要求2所述的试剂盒，其特征在于，其还包括以下试剂中的一种或多种：PCR缓冲液、MgCl₂、dNTP、DNA聚合酶、阴性对照、阳性对照。

4.如权利要求3所述的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照为含有SEQ ID No.3所示序列的质粒载体，所述阴性对照为无核酸酶水。

5.用于PCR检测猪圆环病毒3型的反应体系，其包括：

6.一种用于PCR检测猪圆环病毒3型的方法，其特征在于，该方法是非诊断目的的检测方法，其采用权利要求1所述的引物或权利要求2所述的试剂盒对待检样品进行PCR扩增，并检测扩增产物。

7.如权利要求6所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)准备检测样本的DNA；

(2)对步骤(1)所述DNA进行PCR扩增；其中，在反应体系中，采采用上下游引物的核苷酸序列如SEQ ID No.1和SEQ ID No.2所示；

(3)对所述步骤(2)的扩增产物进行电泳；

(4)结果判定：样品出现345bp扩增条带为猪圆环病毒3型检测阳性，否则为阴性。

8.如权利要求6所述的方法，其特征在于，所述待检样本取自猪的临床病料，病料总DNA提取前还包括病料的预处理，所述病料的预处理为：取脏器组织样本时将样本在灭菌生理盐水中研磨均匀混悬并反复冻融三次后，离心取上清。

9.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中的反应体系中，含所述上游引物、下游引物的终浓度为0.5μmol/L，MgCl₂终浓度为2.5mmol/L、dNTP终浓度为0.2mmol/L，DNA聚合酶1unit，

所述步骤(2)中PCR扩增的条件为：预变性94℃5min；30个循环，每个循环为94℃20s，62℃梯度退火20s，72℃20s；最后经过72℃2min延伸。

10.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，还包括设置阴性对照和/或阳性对照，当设置阴性对照时，如果样品扩增产物出现345bp扩增条带，且阴性对照无相应的扩增条带时，则样品为猪圆环病毒3型检测阳性，否则为阴性；当设置阳性对照时，如果待检样品中未出现345bp扩增条带，阳性样品出现相应条带，则样品为阴性，如果阳性样品中未出现345bp扩增条带，则结果存疑，应重新检测。