[发明专利]一种基于毛细管电泳技术鉴定易成花荔枝种质资源的方法

权利要求书

1.一种基于毛细管电泳技术鉴定易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，包括如下步骤：

(1)提取待检测荔枝的DNA；

(2)PCR扩增：以待检测的荔枝DNA为模板，以上游引物LcCeED-F和下游引物LcCeED-R进行PCR扩增；

(3)PCR产物毛细管电泳检测：取1μL的PCR产物分别加入9μL的去离子甲酰胺和1μL的GS3730-500分子量内标，95℃预变性5min，4℃再保温10min，然后通过ABI3730XL DNA分析仪进行毛细管电泳，再用GeneMarker V1.91 Demo软件进行分析生成图谱；

(4)易成花荔枝种质资源的鉴定分析：以待检测的荔枝DNA样品为模板进行PCR扩增，PCR扩增产物经毛细管电泳检测，如果在674bp处出现单一峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因纯合低温敏感型易成花荔枝种质资源；如果在659bp和674bp处同时出现两个峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因低温敏感型和低温不敏感型的杂合易成花荔枝种质资源；如果在659bp处出现单一峰值，则表明待检测荔枝为LcFT1基因纯合低温不敏感型荔枝种质资源。

2.根据权利要求1所述的基于毛细管电泳技术鉴定易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，步骤(4)中设计的一对上下游引物LcCeED-F和LcCeED-R进行PCR扩增，扩增的674bp目的条带其具有如Seq ID NO.3所示的序列，用于检测LcFT1基因低温敏感型启动子；扩增的659bp目的条带其具有如Seq ID NO.4所示的序列，用于检测LcFT1基因低温不敏感型启动子。

3.根据权利要求1所述的基于毛细管电泳技术鉴定易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，步骤(2)中所述的PCR扩增的反应体系共25μL，具体组成如下：2×Taq PCR MasterMix(TIANGEN)12.5μL，DNA模板1μL，上下游引物各1μL，水9.5μL。

4.根据权利要求3所述的基于毛细管电泳技术鉴定易成花荔枝种质资源的方法，其特征在于，所述的上游引物为Seq ID NO.1所示的序列，所述的下游引物为Seq ID NO.2所示的序列。