[发明专利]一种检测番茄早疫病菌的环介导等温扩增引物及应用在审
| 申请号： | 201711013849.2 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN108330178A | 公开（公告）日： | 2018-07-27 |
| 发明（设计）人： | 兰成忠;游泳;阮宏椿;吴玮;姚锦爱 | 申请（专利权）人： | 福建省农业科学院植物保护研究所 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12Q1/04;C12N15/11 |
| 代理公司： | 福州元创专利商标代理有限公司 35100 | 代理人： | 蔡学俊 |
| 地址： | 350013 福建省福*** | 国省代码： | 福建;35 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 番茄早疫病菌 引物 环介导等温扩增 种检测 检测 病原菌 番茄早疫病 核苷酸序列 热循环仪器 特异性引物 昂贵设备 现场检测 病害 灵敏 应用 费力 防治 | ||
1. 一种检测番茄早疫病菌的环介导等温扩增引物，其特征在于，所述的引物由F3、B3、FIP和BIP 4条特异性引物组成，其核苷酸序列分别为：F3:5’- TCTCTTGGTTCTGGCATCGA -3’，B3: 5’- TTAAGGCGAGTCTCCCGC -3’，FIP: 5’- GGCGCAATGTGCGTTCAAAGAT-GAACGCAGCGAAATGCGATA -3’，BIP: 5’- TGGTATTCCAAAGGGCATGCCT-CCCAACACCAAGCAAAGCT- 3’。
2.利用权利要求1所述引物建立的番茄早疫病菌环介导等温扩增检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：
1）待测样品中DNA模板的提取：用CTAB方法或DNA提取试剂盒提取待测样品中DNA；
2）LAMP恒温扩增：在PCR管中配制25μL反应体系，包括5 μM引物F3和B3各1.0 μL，40 μM引物FIP和BIP各1.0 μL，LAMP反应混合液12.5μL，8 U
3）SYBR Green I荧光染色法判断反应结果：在反应产物中加入1μL SYBR Green I荧光显色剂轻轻混匀，静置5min进行显色观察，在常光下反应显现绿色则待测样品中含有菜用番茄早疫病菌，反应显现橙色则待测样品中不含有番茄早疫病菌，在紫外光下若观察到浑浊状沉淀则样品中含有番茄早疫病菌，澄清透明则样品中不含有番茄早疫病菌。
3. 根据权利要求2所述的番茄早疫病菌环介导等温扩增检测的方法，其特征在于，LAMP反应混合液由如下成分组成：40 mM Tris-HCl，20 mM (NH4)2SO4，20 mM KCl，16 mMMgSO4，1.6 mol/L甜菜碱，2.0 mM dNTPs，0.2wt.% Trion X-100。
4.如权利要求1所述引物在番茄早疫病菌环介导等温扩增检测中的应用。
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