[发明专利]一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法

权利要求书

1.一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物及其制备方法，其特征在于，该方法包括如下步骤：

S1、脐带采集后洗净、切碎，置于培养瓶中贴壁培养；

S2、间充质干细胞的体外培养；

S3、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，过滤上清除菌；

S4、清洗培养瓶，加入生理盐水继续培养，破碎细胞后离心，过滤膜得到干细胞提取液；

S5、制备灵芝醇提物；

S6、将干细胞提取液与灵芝醇提物按照质量比5-6：1充分混合即得。

2.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，其特征在于：所述S1中的具体步骤为，脐带采集后用含有双抗的PBS缓冲液清洗，将脐带组织切碎至1.5-3mm小块，置于培养瓶中贴壁培养，加入间充质培养基。

3.根据权利要求2所述的一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，其特征在于：所述间充质培养基为DF12培养基，培养基中含有2％胎牛血清、40％MCDB201、10-15μg/L血小板衍生生长因子、10-12μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10-15μg/L表皮生长因子。

4.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，其特征在于：所述S2中的具体步骤为，将培养瓶置于37℃5％培养箱中培养，每隔20-26h补充培养基，酶70-72h换液一次，当细胞密度为80％时，加入1.25g/L胰蛋白酶溶液消化，以1：2比例进行传代培养。

5.根据权利要求1所述的一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，其特征在于：所述S5中的具体步骤为，取灵芝子实体洗净、粉碎、过筛，将灵芝粉末加入至95％乙醇溶液中，70-80℃水浴回流1h，收集醇提物2次，之后经50℃旋转蒸发浓缩至原体积的10％，将浓缩后的醇提液经减压浓缩后，干燥得到灵芝醇提物。

6.根据权利要求5所述的一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，其特征在于：所述灵芝粉末与乙醇溶液固液比为1：5。

7.一种权利要求1所述的具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物，其特征在于，干细胞提取液与灵芝醇提物按照5-6：1的质量比混合后得到。