[发明专利]一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法

说明书

技术领域

本发明属于生物医学领域，特别是涉及一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法。

背景技术

间充质干细胞是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层，属于多能干细胞，MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。

如间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。

发明内容

本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，可促进机体干细胞增殖、分化，提高身体免疫力和抗衰老作用。

本发明是通过以下技术方案实现的：

一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，该方法包括如下步骤：

S1、脐带采集后洗净、切碎，置于培养瓶中贴壁培养；

S2、间充质干细胞的体外培养；

S3、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，过滤上清除菌；

S4、清洗培养瓶，加入生理盐水继续培养，破碎细胞后离心，过滤膜得到干细胞提取液；

S5、制备灵芝醇提物；

S6、将干细胞提取液与灵芝醇提物按照质量比5-6：1充分混合即得。

进一步地，所述S1中的具体步骤为，脐带采集后用含有双抗的PBS缓冲液清洗，将脐带组织切碎至1.5-3mm小块，置于培养瓶中贴壁培养，加入间充质培养基。

进一步地，所述间充质培养基为DF12培养基，培养基中含有2％胎牛血清、 40％MCDB201、10-15μg/L血小板衍生生长因子、10-12μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10-15μg/L表皮生长因子。

进一步地，所述S2中的具体步骤为，将培养瓶置于37℃5％培养箱中培养，每隔20-26h补充培养基，酶70-72h换液一次，当细胞密度为80％时，加入1.25g/L 胰蛋白酶溶液消化，以1：2比例进行传代培养。

进一步地，所述S5中的具体步骤为，取灵芝子实体洗净、粉碎、过筛，将灵芝粉末加入至95％乙醇溶液中，70-80℃水浴回流1h，收集醇提物2次，之后经50℃旋转蒸发浓缩至原体积的10％，将浓缩后的醇提液经减压浓缩后，干燥得到灵芝醇提物。

进一步地，所述灵芝粉末与乙醇溶液固液比为1：5。

进一步地，一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物，其特征在于，干细胞提取液与灵芝醇提物按照5-6：1的质量比混合后得到。

本发明具有以下有益效果：

该组合物富含干细胞因子群、多肽、天然免疫蛋白、核酸、三萜类化合物、生物碱、灵芝甾醇和活性酶等多种活性物质，可促进机体干细胞增殖、分化，提高身体免疫力和抗衰老作用。该活性物质组合物可制成片剂、粉剂或胶囊，在医学和保健领域有极佳的应用前景。

当然，实施本发明的任一产品并不一定需要同时达到以上所述的所有优点。

具体实施方式

本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其它实施例，都属于本发明保护的范围。

本发明为一种具有抗肿瘤功效的灵芝生物活性物质与人源干细胞活性因子组合物的制备方法，该方法具体步骤如下：

实施例1

S1、脐带采集后用含有双抗的PBS缓冲液清洗，将脐带组织切碎至1.5mm 小块，置于T25培养瓶中贴壁培养，加入间充质培养基，其中间充质培养基为 DF12培养基，培养基中含有2％胎牛血清、40％MCDB201、10μg/L血小板衍生生长因子、10μg/L碱性成纤维细胞生长因子、10μg/L表皮生长因子；

S2、将培养瓶置于37℃5％培养箱中培养，每隔20h补充培养基，酶70h换液一次，当细胞密度为80％时，加入1.25g/L胰蛋白酶溶液消化，以1：2比例进行传代培养；

S3、细胞培养至若干小时后，收集上清至离心管，0.22μm滤膜过滤上清除菌；

S4、用生理盐水清洗2次培养瓶，弃去，继续加入生理盐水置于T225培养瓶继续培养12小时；