[发明专利]一种快速检测茶树炭疽病菌的LAMP引物及检测方法

说明书

本发明提供了一种快速检测茶树炭疽病菌的LAMP引物及检测方法。本发明针对茶树炭疽病菌的beta‑tubulin（TUB2）基因序列设计和筛选了一套特异性的检测引物组，该引物组由4条特异性引物F3、B3、FIP和BIP组成。本发明筛选到的引物灵敏度高、特异性强，建立的检测方法具有准确率高、特异性强、易于操作、检测时间短、仪器设备简单等优点，适用于发病组织及带菌植株中茶树炭疽病菌的高灵敏度快速检测、鉴定和病害早期诊断，对于农业生产中茶树炭疽病害的早期监测，确定病害最佳防治时期具有十分重要的意义。

技术领域

本发明属于农作物病害检测、鉴定及防治领域，具体涉及一种茶树炭疽病菌LAMP检测引物、检测方法和在茶树炭疽病的早期诊断、病菌的监测和鉴定中的应用。

背景技术

茶叶作为三大无酒精饮料之一，含有多种对人体有益的化学成分，可有效降低人体患病机率，深受世界各国消费者的喜爱。我国是一个产茶大国，也一个茶叶出口大国，在我国的经济发展过程中茶叶的生产至关重要。目前，中国有20个省（市、自治区）产茶，经济产值达26 亿美元，茶树（Camellia sinensis）已成为中国南方地区特别是山区重要的经济作物之一。

随着茶叶需求量的增加，全球茶园面积不断扩大，部分地区茶园管理粗放，加上环境的恶化，使得茶树病虫害越来越严重。其中，炭疽病是中国茶树主要病害之一，该病在我国茶区普遍发生，浙江、安徽、湖南、云南和四川均有报道，尤以西南、江南等温暖湿润的亚热带和热带茶区山区茶园发生较普遍，条件适宜的年份发生较重，可导致茶树大量落叶，甚至枯死，影响树势及茶叶产量和品质。该病害主要发生于当年生的成叶和嫩叶，春秋两季发生较重，严重时茶树染病率达70%以上，造成茶叶减产达40%～50%。

炭疽菌是造成茶树发生炭疽病的重要致病菌，国内外大量研究工作表明，引起茶树炭疽病的病原菌主要有Colletotrichum camelliae、C. gloeosporioides、C. acutatum、C. karstii、C. fioriniae、C. fructicola、C.siamense、C. cliviae和C. boninense等，其中C. camelliae 在中国大部分茶区均有分布，且可以危害绝大多数品种茶树，是危害中国茶树的主要优势种。因此，开展茶树炭疽病菌（C.camelliae）快速分子检测、鉴定技术，可为茶树炭疽病的准确诊断和及时防治提供技术支持和理论依据。

病害的准确诊断是病害防控的基础，长期以来，真菌分类和鉴定的经典方法是依据真菌的形态学和解剖学表型特征及生境特点来进行。运用形态学进行鉴定，方法简单易行，不需要昂贵的仪器，但需要有病征或获得真菌的纯培养，更要有丰富的鉴定经验和足够的文献资料。以形态结构为基础的分类系统在一定程度上受人为因素的干扰，而且真菌的形态和解剖结构复杂多变，获得其有性或无性器官需较长时间，有些种类真菌不易甚至不能形成有性繁殖结构，形态相似的种和变种难以区分；有些真菌形态变异大，分类、鉴定的依据不太稳定；有些真菌形态特征很难进行定量描述，容易造成误差，这些因素给分类鉴定带来诸多不便，以至于病原菌传统的形态学和解剖学分类、鉴定方法不能满足病害快速、准确鉴定、诊断的需求。