[发明专利]用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的引物组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一种用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的引物组，其特征在于，所述引物组包括扩增引物对、探针及PNA，其中：

所述扩增引物对序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探针序列为：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述PNA序列为：

NH₂-5’-GATGTTGCTTCTCTTAATTCC-3’-COOH。

2.一种用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括两套PCR反应体系，第一套PCR反应体系包括针对EGFR基因19外显子野生型和缺失突变检测设计的扩增引物对及探针，其中：

所述扩增引物对序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探针序列为：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述第一套PCR反应体系还包括2×PCRbuffer、DNA模板和去离子水；

第二套PCR反应体系包括针对EGFR基因19外显子缺失突变检测设计的扩增引物对、探针及PNA，其中：

所述扩增引物对序列如下：

正向引物：5’-TCCCAGAAGGTGAGAAAGT-3’；

反向引物：5’-GGATTTCCTTGTTGGCTTT-3’；

所述探针序列为：FAM-5’-ATTCCCGTCGCTATC-3’-MGB；

所述PNA序列为：

NH₂-5’-GATGTTGCTTCTCTTAATTCC-3’-COOH；

所述第二套PCR反应体系还包括2×PCRbuffer、DNA模板和去离子水。

3.根据权利要求2所述的用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述第一套PCR反应体系的成分终浓度为：1×PCR buffer、0.2μM正向引物、0.2μM反向引物、0.2μM探针和1μL DNA模板。

4.根据权利要求3所述的用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述第二套PCR反应体系的成分终浓度为：1×PCR buffer、0.2μM正向引物、0.2μM反向引物、0.2μM探针、2μM PNA和1μL DNA模板。

5.根据权利要求2至4任一项所述的用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品、阴性对照品和空白对照品。

6.根据权利要求5所述的用于检测EGFR基因19外显子缺失突变的试剂盒，其特征在于，所述阳性对照品为EGFR基因突变型质粒，所述阴性对照品为EGFR基因野生型质粒，所述空白对照品为无核酸酶水。

7.一种检测EGFR基因19外显子缺失突变的方法，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一：取待检测样本抽提的DNA，作为PCR模板；

步骤二：提供如权利要求6所述的试剂盒，取出适量第一套PCR反应体系和第二套PCR反应体系，将适量PCR模板分别与第一套PCR反应体系和第二套PCR反应体系分别混匀；

步骤三：两套PCR反应体系均进行PCR扩增反应：95℃预变性5min；45cycles，95℃15sec，58℃30sec；

步骤四：PCR结果判定：在所述试剂盒的阳性对照品、阴性对照器和空白对照品符合规定的情况下，根据荧光扩增曲线得到两套PCR反应体系的CT值及其差值定性判断EGFR基因19外显子缺失突变。