[发明专利]PGC-1α特异性RNA干扰腺病毒的应用有效
| 申请号： | 201711016863.8 | 申请日： | 2017-10-26 |
| 公开（公告）号： | CN107929305B | 公开（公告）日： | 2020-09-04 |
| 发明（设计）人： | 陈烨;孟文芳;胡晓佳 | 申请（专利权）人： | 浙江大学 |
| 主分类号： | A61K31/713 | 分类号： | A61K31/713;A61K35/761;A61P35/02;C12N15/861 |
| 代理公司： | 杭州天正专利事务所有限公司 33201 | 代理人： | 黄美娟;李世玉 |
| 地址： | 310027 浙*** | 国省代码： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | pgc 特异性 rna 干扰 病毒 应用 | ||
1.一种PGC-1α特异性RNA干扰腺病毒在制备降低白血病细胞耐药性药物中的应用，其特征在于所述的PGC-1α特异性RNA干扰腺病毒是将PGC-1α特异性小干扰RNA导入腺病毒载体获得的，所述PGC-1α特异性小干扰RNA核苷酸序列为caaaa agact attgc cagtc aattaatctc gagat taatt gactg gcaat agtc。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述白血病细胞为急性髓性白血病细胞。
3.如权利要求1所述的应用，其特征在于所述PGC-1α特异性RNA干扰腺病毒制备方法为：(1)根据PGC-1α特异性小干扰RNA核苷酸序列，分别合成正义链引物和反义链引物；两条引物经过退火直接形成双链DNA，继而与线性化的穿梭载体pENTRTM/U6的粘性末端连接；连接产物转化Ecoli.DH5a感受态细胞，卡那霉素抗性琼脂平板挑选阳性克隆、质粒抽提并测序验证，获得pENTR-U6-shRNA-CMV载体；
正义链引物：ccggg actat tgcca gtcaa ttaat ctcga gatta attga ctggc aatagtcttt ttg；
反义链引物：aattc aaaaa gacta ttgcc agtca attaa tctcg agatt aattg actggcaata gtc；
(2)将pENTR-U6-shRNA-CMV载体和pAd/BLOCK-IT-DEST进行LR重组，得到重组腺病毒载体pAD-U6-shRNA-CMV；(3)将步骤(2)重组腺病毒载体pAD-U6-shRNA-CMV用Pac I酶切、纯化后，转染293A细胞，待80％细胞出现病理效应后，收集细胞，-80℃、20min和37℃、10min反复冻融两次，3500rmp离心10分钟，收集上清，即为PGC-1α特异性RNA干扰腺病毒病毒液。
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