[发明专利]一种提取板蓝根干样基因组DNA的方法在审
申请号: | 201711017592.8 | 申请日: | 2017-10-26 |
公开(公告)号: | CN107586773A | 公开(公告)日: | 2018-01-16 |
发明(设计)人: | 邹志文;许睿;夏斌;辛天蓉;王静;奚剑飞 | 申请(专利权)人: | 南昌大学 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10 |
代理公司: | 南昌新天下专利商标代理有限公司36115 | 代理人: | 施秀瑾 |
地址: | 330031 江西省*** | 国省代码: | 江西;36 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 提取 板蓝根 基因组 dna 方法 | ||
1.一种提取板蓝根干样基因组DNA的方法,其特征是按如下步骤:
(1)取去除表皮的板蓝根干样组织0.05~0.1 g,使用液氮在研钵中研磨成粉末,在组织解冻前转移到1.5mL离心管中;
(2)加入500~750 μL的 2%的CTAB溶液,颠倒混匀后在65℃水浴2~3 h,期间要上下颠倒混匀数次;
(3)取出离心管,加入与步骤(2)等体积的按24:1体积比混合的三氯甲烷与异戊醇的混合液,上下颠倒充分混合,晃动数次;
(4)4℃条件下14000 rpm 离心15min;
(5)用移液枪吸取管中上层水相;
(6)在抽提出的水相中加入与等体积4℃下预冷的异丙醇,轻轻晃动混匀后在-20 ℃沉淀6~12小时;
(7)4℃条件下14000 rpm 离心15min,去上清,倒置于吸水纸上控干;
(8)加入与步骤(2)等体积的无水乙醇,上下颠倒数次,洗涤沉淀,4℃条件下12000 rpm离心10min离心,去上清,倒置于吸水纸上控干;
(9)重复步骤(8)两遍;
(10)将步骤(9)所得沉淀置于超净工作台中吹干;
(11)在离心管中加入30~50 μL的灭菌去离子水或者TE缓冲液(Tris-EDTA buffer solution),4℃放置4~6小时;
(12)-20℃或-80℃低温保存。
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