[发明专利]一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用，属于基因工程及分子免疫学技术领域。本发明的技术方案要点为：一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗，该亚单位疫苗蛋白的基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。本发明还具体公开了该草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗的制备方法及其作为抗草鱼呼肠孤病毒感染疫苗用于提高草鱼感染草鱼呼肠孤病毒后鱼体的存活率。本发明中草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗为新型抗原蛋白疫苗，其制备方法简单，成分明确，安全稳定，能够诱导草鱼鱼体产生较高的非特异性和特异性免疫应答，进而获得较好的免疫保护效果。

技术领域

本发明属于基因工程及分子免疫学技术领域，具体涉及一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗及其制备方法和应用。

背景技术

我国水产养殖以淡水鱼类为主，其中草鱼（Ctenopharyngodon idellus）养殖是淡水养殖中重要的组成部分，也是国内养殖量最大的鱼类。草鱼由于饲料来源广、生长速度快及经济价值高而广受养殖人员的喜爱，养殖范围广且规模大。但草鱼抗病能力差，各个阶段都易受到病害感染，常见疾病有草鱼肠炎病、赤皮病、烂鳃病和病毒性出血病，其中由草鱼呼肠孤病毒（Grass carp reovirus，GCRV）引起的草鱼出血病是草鱼养殖中较为严重的传染病之一，对我国淡水养殖造成巨大的经济损失。

目前市场上草鱼呼肠孤病毒的灭活疫苗和减毒活疫苗正逐步推广使用，而草鱼呼肠孤病毒亚单位疫苗仍没有应用，并且病毒疫苗主要针对的是I型草鱼呼肠孤病毒，当前在国内流行最广、毒力较强的是II型草鱼呼肠孤病毒。现有的传统疫苗不能满足草鱼养殖业的发展，所以寻找一种安全、稳定、成分明确的草鱼呼肠孤病毒亚单位疫苗具有非常广阔的发展前景和应用价值，对草鱼养殖业的经济发展、养殖环境的改善以及我国提出绿色可持续养殖理念具有重要意义。

当前草鱼呼肠孤病毒亚单位疫苗的研究现状主要围绕草鱼呼肠孤病毒外衣壳蛋白VP4-VP7研制，已经申报了一些专利，例如申请号为201110189906.9的专利公开了一种草鱼呼肠孤病毒基因工程疫苗的制备方法，采用sf9昆虫细胞增殖重组GCRV外衣壳蛋白VP5和VP7的重组杆状病毒（vAcGCRV-VP5/VP7）制备疫苗与应用；又如申请号为201310513653.5的专利公开了一种草鱼呼肠孤病毒II型S10基因编码的重组蛋白、由其制备的多克隆抗体及应用。但以上疫苗主要针对I型草鱼呼肠孤病毒，近年来随不同地区病毒分离鉴定， 越来越多的II型草鱼呼肠孤病毒强毒力株，如GCRV HZ08、GCRV-GD108、GCReV109等不断被发现，而目前针对II型草鱼呼肠孤病毒的疫苗种类数量极少，已不能满足生产实际需要。

为了适应生态渔业生产需求，以促进草鱼养殖业可持续健康发展，本发明的目的是寻找一种新型的抗原蛋白，为草鱼呼肠孤病毒亚单位疫苗提供更多的候选疫苗蛋白。通过生物信息学的技术方法和实验验证，发现II型草鱼呼肠孤病毒S11节段编码的VP35蛋白具有CxxC-n16-HxC锌指结合基序，是病毒外衣壳蛋白的主要成分，并且具有良好的免疫原性，能够刺激鱼体产生保护性的中和抗体，因此本发明将VP35蛋白制备成了亚单位疫苗，并验证了其应用效果。

目前，未见利用草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白制备亚单位疫苗的相关报道。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供了一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗及其制备方法，该亚单位疫苗能够有效预防草鱼呼肠孤病毒引起的草鱼出血病。

本发明为解决上述技术问题采用如下技术方案，一种草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗，其特征在于：所述亚单位疫苗蛋白的基因序列如序列表SEQ ID No.1所示。

本发明所述的草鱼呼肠孤病毒VP35蛋白亚单位疫苗，其特征在于：所述亚单位疫苗蛋白的氨基酸序列如序列表SEQ ID No.4所示。