[发明专利]一种银的耐高盐核酸传感器及其应用

权利要求书

1.一种银的耐高盐核酸传感器，包括分子识别元件、信号放大元件和信号转换元件，其特征在于，

所述分子识别元件包括银离子脱氧核酶；所述银离子脱氧核酶由底物链与酶链组成；

所述信号放大元件包括等温扩增体系，所述信号转换元件包括氯高铁血红素和显色剂；

所述脱氧核酶底物链、酶链和扩增模板序列如下表：

所述等温扩增体系包括A体系和B体系；

所述A体系包括：扩增模板、dNTPs、脱氧核酶切割产物；

所述B体系包括：Bst DNA聚合酶及其缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶及其缓冲溶液。

2.根据权利要求1所述的传感器，其特征在于，所述信号转化元件还包括终止剂，所述显色剂为TMB显色剂。

3.根据权利要求2所述的传感器，其特征在于，所述终止剂为硫酸。

4.权利要求1-3任一项所述的传感器在检测银离子中的应用。

5.一种检测银离子的方法，其特征在于，包括的步骤如下：

制备银离子浓度和G-四链体功能核酸显色光密度关系的标准曲线；

按上述制备标准曲线的过程进行待测样品的检测，得到待测样品的G-四链体功能核酸显色光密度值，通过上述标准曲线计算银离子的浓度；

其中银离子浓度和G-四链体功能核酸显色光密度关系的标准曲线的步骤包括：

(1)制备银离子脱氧核酶切割产物：将银离子脱氧核酶底物链与酶链混合、加热、降温得到银离子脱氧核酶，然后加入不同浓度的银离子溶液反应，终止反应后，得到不同浓度的银离子脱氧核酶切割产物溶液；

(2)目标产物的等温扩增：

等温扩增体系由A体系、B体系组成；

所述A体系包括扩增模板、dNTPs、银离子脱氧核酶切割产物；

所述B体系包括Bst DNA聚合酶、聚合酶反应缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶和Nt.BstNBI切刻内切酶反应缓冲溶液；

所述脱氧核酶底物链、酶链和扩增模板序列如下表：

其中扩增模板中GACTC为Nt.BstNBI切刻内切酶识别序列；

将所述不同浓度的银离子脱氧核酶切割产物溶液与扩增模板和dNTPs混合，制备不同的银离子浓度的A体系，然后分别与B体系混合，进行等温扩增反应，得到一系列浓度的扩增产物；

(2)G-四链体结构显色物制备

将氯高铁血红素与上述一系列扩增产物分别进行反应，然后加入显色剂后进行OD值检测，得到OD值随银离子浓度变化的标准曲线。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述银离子脱氧核酶的制备方法包括：将银离子脱氧核酶底物链与银离子脱氧核酶酶链用缓冲液稀释，95℃加热15min，然后缓慢降温至25℃。

7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述等温扩增反应的步骤为：加入银离子溶液的A体系在进行等温扩增反应前95℃孵育5min后，A体系和B体系迅速进行混合，55℃孵育扩增20min；95℃保持10min，以终止反应。

8.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，氯高铁血红素与扩增产物反应的方法为：将氯高铁血红素与扩增产物混匀后37℃反应30min，加入TMB显色剂，混匀，37℃反应10min，H₂SO4终止反应。

9.一种检测银离子的试剂盒，其特征在于，包括：银离子脱氧核酶体系、等温扩增体系和显色体系；

所述银离子脱氧核酶体系包括底物链、酶链、银离子标准溶液；

所述等温扩增体系包括A体系、B体系，所述A体系包括扩增模板和dNTPs；

所述B体系包括Bst DNA聚合酶、聚合酶反应缓冲溶液、Nt.BstNBI切刻内切酶和Nt.BstNBI切刻内切酶反应缓冲溶液；

所述脱氧核酶底物链、酶链和扩增模板序列如下表：

其中扩增模板中GACTC为Nt.BstNBI切刻内切酶识别序列；

所述显色体系包括：氯高铁血红素和显色剂，所述显色剂为TMB显色剂。