[发明专利]一种同时测定丹参中6种内源激素含量的HPLC方法

权利要求书

1.一种同时测定丹参中多种内源激素含量的HPLC方法，其特征在于：步骤如下：

a、制备供试品溶液：

取丹参花，以甲醇为溶剂提取，离心、浓缩，再分别经石油醚、乙酸乙酯萃取，浓缩，用乙腈溶解、过滤，得供试品溶液；

b、制备对照品溶液：

取各激素对照品，混合，加乙腈溶解，配制成混合对照品溶液；

c、分别将供试品溶液和对照品溶液注入高效液相色谱仪检测，色谱条件如下：

色谱柱：C18色谱柱；

流动相：流动相A为体积分数为0.1%的磷酸水溶液，B为乙腈，梯度洗脱程序为：

0~15 min，5%~10% B：

15~30 min，10%~25% B；

30~40 min，25%~35% B；

40~42 min，35%~40% B；

检测波长：分别为210 nm和254nm；

d、根据检测结果计算得到丹参花中的各激素含量；

所述内源激素为玉米素、玉米素核苷、激动素、生长素、赤霉素和脱落酸；

步骤a中，以甲醇为溶剂提取的方法为：取丹参花1重量份，研磨后，加入PVPP 0.2重量份、体积分数为80%的甲醇溶液30体积份，4℃放置24h，得上清液备用；

将沉淀用体积分数为80%的甲醇溶液研磨分两次提取，每次30min；提取液与上清液合并待用。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤a中，所述离心的条件为4℃，10000r/min离心15min。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述色谱柱的规格为：内径4.6mm，长度250mm，填料粒径5μm。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述色谱柱型号为Eclipse XDB-C18色谱柱。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于：步骤c中，所述梯度洗脱程序为：0~15 min，5% B：

15~30 min，10% B；

30~40 min，25% B；

40~42 min，35% B；

42 min，40% B。

6.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于：所述色谱条件的柱温为35℃；流速为1 mL/min。

7.根据权利要求1-5任意一项所述的方法，其特征在于：所述供试品溶液的进样量为10μL。

8.根据权利要求6所述的方法，其特征在于：所述供试品溶液的进样量为10μL。